福山型筋ジストロフィーのロングリードシークエンサーによる診断法確立と病態解明

福山型先天性筋ジストロフィー（FCMD）は胎児期発症の重度の筋ジストロフィーに脳の形成異常や眼奇形を伴う本邦に特に多い小児難病で、本邦における患者数約2000人の劣性遺伝病である。すべての患者がフクチン(FKTN)の3’非翻訳領域にレトロトランスポゾン（SINE-VNTR-Alu；SVA）挿入変異をもつ。FCMDはその挿入変異が引き起こすスプライシング異常症である。これに対しアンチセンス療法が本邦にて開発され、治験に向け準備中である。治療法開発に伴い、早期診断・早期治療の重要性が高まってくることが予想されるが、SVA挿入変異の詳細な配列の検出はその複雑な核酸配列により容易ではなく、また罹患者の15％は複合へテロ型変異を有するため、現在の診断法には限界がある。そこで本研究では、ゲノム編集技術、ロングリードシークエンサーを駆使して迅速・正確・ロバストなFCMD患者の遺伝学的検査法を確立し、早期診断・治療に役立てることを目指す。今年度はロングリードシークエンサーであるナノポアシーケンサーを用いてSVA配列の解読を45名の患者検体で行い、Miseqによるシーケンス補正を行った。多型について現在、確認し、臨床所見との比較を行っているところである。また患者尿検体を用いた疾患筋樹立のために、尿由来幹細胞の樹立を行った。今後、筋への分化誘導も進める予定である。尿由来の幹細胞は非侵襲的で安価、簡便であり、本邦で開発されたアンチセンス療法についての治療効果判定に役立つ可能性がある。

福山型先天性筋ジストロフィー（FCMD）は胎児期発症の重度の筋ジストロフィーに脳の形成異常や眼奇形を伴う本邦に特に多い小児難病で、本邦における患者数約2000人の劣性遺伝病である。すべての患者がフクチン(FKTN)の3’非翻訳領域にレトロトランスポゾン（SINE-VNTR-Alu；SVA）挿入変異をもつ。FCMDはその挿入変異が引き起こすスプライシング異常症である。これに対しアンチセンス療法が本邦にて開発され、治験に向け準備中である。治療法開発に伴い、早期診断・早期治療の重要性が高まってくることが予想されるが、SVA挿入変異の詳細な配列の検出はその複雑な核酸配列により容易ではなく、また罹患者の15％は複合へテロ型変異を有するため、現在の診断法には限界がある。そこで本研究では、ゲノム編集技術、ロングリードシークエンサーを駆使して迅速・正確・ロバストなFCMD患者の遺伝学的検査法を確立し、早期診断・治療に役立てることを目指す。今年度はロングリードシークエンサーであるナノポアシーケンサーを用いてSVA配列の解読を45名の患者検体で行い、Miseqによるシーケンス補正を行った。多型について現在、確認し、臨床所見との比較を行っているところである。また患者尿検体を用いた疾患筋樹立のために、尿由来幹細胞の樹立を行った。今後、筋への分化誘導も進める予定である。尿由来の幹細胞は非侵襲的で安価、簡便であり、本邦で開発されたアンチセンス療法についての治療効果判定に役立つ可能性がある。