新規治療ターゲットとしての汗中ヒスタミンの産生機序と病的意義の解析

前年度までの研究では、マウス汗腺ではヒスタミン産生に必要なHDC遺伝子が発現していること、in-vitroで培養した汗腺細胞内にヒスタミン産生が検出されることを明らかにした。本年度は、まずマウス汗腺におけるヒスタミンの代謝酵素や輸送蛋白の発現を調べた。マウス汗腺から抽出したmRNAを用いて、細胞内で産生されたヒスタミンの代謝や輸送に関わる遺伝子が発現することを検出した。また、マウス足底の皮膚組織を用いた免疫染色によりマウス汗腺におけるHDC蛋白発現の局在を検討したところ、汗腺分泌部ないし汗管部にHDC蛋白が発現していることを確認できた。その産生が汗腺分泌部細胞にあるのか、あるいは汗管上皮細胞にあるのかを区別する必要があり、各部位に特異的な蛋白発現を指標として、HDC蛋白との蛍光二重染色を行うための条件を検討中である。さらに、汗腺におけるヒスタミン産生を増強する因子を探索するために、in-vitroの汗腺培養系に種々の神経ペプチドやサイトカインを添加し、誘導されるHDC遺伝子の発現量を測定した。無刺激の汗腺と比較して優位に産生増強を誘導する分子を選別しつつある。一方、汗中にはヒスタミンに外にも多数の抗菌ペプチドや炎症性メディエータが含まれている。本研究で確立した培養系を利用することで、ヒスタミン以外に汗中に検出される他の炎症性メディエータの産生の有無や産生増強因子についても検討中である。その中で、マウス表皮と汗腺では抗菌ペプチドの産生の仕方に違いがあることが分かった。

前年度までの研究では、マウス汗腺ではヒスタミン産生に必要なHDC遺伝子が発現していること、in-vitroで培養した汗腺細胞内にヒスタミン産生が検出されることを明らかにした。本年度は、まずマウス汗腺におけるヒスタミンの代謝酵素や輸送蛋白の発現を調べた。マウス汗腺から抽出したmRNAを用いて、細胞内で産生されたヒスタミンの代謝や輸送に関わる遺伝子が発現することを検出した。また、マウス足底の皮膚組織を用いた免疫染色によりマウス汗腺におけるHDC蛋白発現の局在を検討したところ、汗腺分泌部ないし汗管部にHDC蛋白が発現していることを確認できた。その産生が汗腺分泌部細胞にあるのか、あるいは汗管上皮細胞にあるのかを区別する必要があり、各部位に特異的な蛋白発現を指標として、HDC蛋白との蛍光二重染色を行うための条件を検討中である。さらに、汗腺におけるヒスタミン産生を増強する因子を探索するために、in-vitroの汗腺培養系に種々の神経ペプチドやサイトカインを添加し、誘導されるHDC遺伝子の発現量を測定した。無刺激の汗腺と比較して優位に産生増強を誘導する分子を選別しつつある。一方、汗中にはヒスタミンに外にも多数の抗菌ペプチドや炎症性メディエータが含まれている。本研究で確立した培養系を利用することで、ヒスタミン以外に汗中に検出される他の炎症性メディエータの産生の有無や産生増強因子についても検討中である。その中で、マウス表皮と汗腺では抗菌ペプチドの産生の仕方に違いがあることが分かった。