歯周組織構成細胞による細胞間相互作用関連因子の同定と歯周病治療への応用

牙周组织构成细胞中细胞间相互作用相关因子的鉴定及其在牙周病治疗中的应用

• 批准号: 21K09921
• 负责人: 中山 洋平
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09921/
• 关键词: 細胞間相互作用; 歯周組織構成細胞; 歯肉接合上皮; アメロチン; 共培養システム

炎症などの体外刺激に対して，歯肉接合上皮は歯面接着機構の恒常性を維持する。歯周病の治癒の際には，由来も性質も異なるセメント質，歯根膜および結合組織が協調して歯周組織が再構築していく。しかし，これら互いに近接する歯周組織間の細胞間相互作用は不明である。今回の研究は，歯肉上皮細胞，セメント芽細胞および歯根膜線維芽細胞3種の細胞から得られたConditional mediumを用いて，歯肉接合上皮の恒常性維持に関するセメント質および歯根膜からの細胞間相互作用に関わるマーカー遺伝子の発現変化を解析することを目的としている。歯肉上皮細胞として不死化ヒト歯肉上皮細胞（TIGKs-hTERT，以下TIGKｓ）をDCBMで培養した。歯根膜細胞にはhTERT-HPL（以下HPL）を使用し，セメント芽細胞としてhTERT-HCEM（以下HCEM）を使用した。HPLとHCEMはαMEMで培養し，80％コンフルエント後に無血清培地に交換し，その後，TIGKｓの培養に使用する培地であるDCBMに換えて72時間培養した。培地はフィルターにかけて回収し，それぞれの細胞からのConditional medium（C-CMおよびP-CM）とした。同様にTIGKｓ培養後の培地はT-CMとしてコントロールとした。TIGKｓを培養し，T-CM，C-CMおよびP-CMで48時間刺激して，回収した細胞からRNAを抽出した。Real-time PCRの結果，C-CMおよびP-CMで48時間刺激後，歯肉接合上皮特異的遺伝子であるAmtnおよびLamβ3 mRNAレベルが増加した。同様にP-CM刺激48時間でFDC-SP mRNA量は有意に増加した。次に，これらC-CMやP-CMによる歯肉接合上皮特異的遺伝子の発現変化に関わる細胞内シグナル伝達系を検索するため，マイクロアレイ解析を行った。

In vitro stimulation of に, inflammation な する and <s:1> maintain the <s:1> homeostasis を of the tissue attached to the 歯 meat junction epithelium を 歯 surface する. の 歯 weeks disease cure の interstate に は, origin も nature も different な る セ メ ン ト qualitative, 歯 root membrane お よ び combining organization が coordination し て 歯 weeks が then build し て い く. The interstitial and intercellular interactions of <s:1> れら with each other れら に adjacent する歯 are unclear である. This time, we will study three types of <s:1> cells: 歯, 歯 flesh epithelial cells, セメ, セメ, ト, spore cells, および歯 root membrane line, and spore cells. Youdaoplaceholder5 Conditional mediumを uses 歯 て 歯 meat joint epithelial の constancy to maintain に masato す る セ メ ン ト qualitative お よ び 歯 root membrane か ら の interactions between cells に masato わ る マ ー カ ー heritage 伝 son の 発 now - the を parsing す る こ と を purpose と し て い る. Youdaoplaceholder0 meat epithelial cells と て て undead ヒト歯 meat epithelial cells (tigks-htert, hereinafter TIGKs) をDCBMで cultured た. 歯 root membrane cells に は hTERT - HPL (HPL) use し を, セ メ ン ト bud cells と し て hTERT - HCEM (HCEM) を use し た. HPL と HCEM は alpha MEM で cultivate し, 80% コ ン フ ル エ ン ト after に serum-free culture exchange し に, そ の after TIGKs の cultivate に use す る petty で あ る DCBM に in え て 72 time cultivating し た. The petty は フ ィ ル タ ー に か け て back 収 し, そ れ ぞ れ の cells か ら の Conditional medium (C - CM お よ び P - CM) と し た. In the same way, にTIGKs after culture, the <s:1> culture site T-CMと <s:1> てコ トロ トロ と と た た た た た. TIGKs を cultivate し, T - CM, C - CM お よ び P - CM で 48 time stimulate し て, back 収 し た cells か ら RNA を spare し た. Real - time PCR の results, C - CM お よ び P - CM, after 48 time stimulate で 歯 meat joint epithelial specific heritage 伝 son で あ る Amtn お よ び Lam, beta 3 mRNA レ ベ ル が raised plus し た. Similarly, after 48 hours of にP-CM stimulation, the amount of でFDC-SP mRNA で intentionally に increased た た. に, こ れ ら C - CM や P - CM に よ る 歯 meat joint epithelial specific heritage 伝 son の 発 now - the に masato わ る intracellular シ グ ナ ル 伝 da system を 検 cable す る た め, マ イ ク ロ ア レ イ parsing line を っ た.