歯周組織構成細胞による細胞間相互作用関連因子の同定と歯周病治療への応用

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炎症などの体外刺激に対して，歯肉接合上皮は歯面接着機構の恒常性を維持する。歯周病の治癒の際には，由来も性質も異なるセメント質，歯根膜および結合組織が協調して歯周組織が再構築していく。しかし，これら互いに近接する歯周組織間の細胞間相互作用は不明である。今回の研究は，歯肉上皮細胞，セメント芽細胞および歯根膜線維芽細胞3種の細胞から得られたConditional mediumを用いて，歯肉接合上皮の恒常性維持に関するセメント質および歯根膜からの細胞間相互作用に関わるマーカー遺伝子の発現変化を解析することを目的としている。歯肉上皮細胞として不死化ヒト歯肉上皮細胞（TIGKs-hTERT，以下TIGKｓ）をDCBMで培養した。歯根膜細胞にはhTERT-HPL（以下HPL）を使用し，セメント芽細胞としてhTERT-HCEM（以下HCEM）を使用した。HPLとHCEMはαMEMで培養し，80％コンフルエント後に無血清培地に交換し，その後，TIGKｓの培養に使用する培地であるDCBMに換えて72時間培養した。培地はフィルターにかけて回収し，それぞれの細胞からのConditional medium（C-CMおよびP-CM）とした。同様にTIGKｓ培養後の培地はT-CMとしてコントロールとした。TIGKｓを培養し，T-CM，C-CMおよびP-CMで48時間刺激して，回収した細胞からRNAを抽出した。Real-time PCRの結果，C-CMおよびP-CMで48時間刺激後，歯肉接合上皮特異的遺伝子であるAmtnおよびLamβ3 mRNAレベルが増加した。同様にP-CM刺激48時間でFDC-SP mRNA量は有意に増加した。次に，これらC-CMやP-CMによる歯肉接合上皮特異的遺伝子の発現変化に関わる細胞内シグナル伝達系を検索するため，マイクロアレイ解析を行った。