血小板に含まれるポリリン酸がＰＲＰ組織再生治療において果たす役割の解明

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1) PRPに含まれるpolyPの個体差の評価: 毎日計画的な身体トレーニングを欠かさないJ2リーグのサッカー選手の協力を得て，同年代の一般健康人を比較した．骨格筋のエネルギー代謝が高いアスリートの血小板polyPは，一般人より有意に低いという結果であった．2) 凝固系・線溶系への関与の検討: polyPは血小板の止血効果において重要な役割を示すといれているが，市販の熱重合により人工的に合成されたpolyPを使用する限り，このような効果は認められなかった．3) 骨芽細胞・破骨細胞・血管内皮細胞への影響評価: 市販の合成polyPを培養細胞に投与し，その増殖に及ぼす影響にについて予備実験的に検討した．結果的に有意な影響が認められなかったが，37℃におけるpolyPの半減期が数時間程度であることも確認した．4) サンプルの保存: これまでの予備実験の結果，血小板polyPを再現性高く測定するには，自家蛍光の非常に少ない固定剤を使用して，固定から数日以内に実験に供することが必要であった．しかし，サンプルが多数に及ぶ場合，この方法では処理数に限界がある．そこで，血小板を一晩固定後，水洗し，-80℃で凍結保存することで少なくとも6週間は安定して保存できることを見出した．5) 培養細胞中のpolyP局在の解明: 今後の実験系に使用する骨芽細胞や線維芽細胞において，血小板同様にpolyPの局在を検証した．DAPIに親和性があるDNAについては避けて観察することで影響を最小限にすることができるものの，血小板に認められたような強染色を示すpolyPの局在は認められず，細胞全体がDAPIに染まるような像が観察された．