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リン酸化ペプチドの網羅的解析のための新技術開発

磷酸化肽综合分析新技术开发

基本信息

批准号：
18016024
负责人：
松本雅記
金额：
$ 4.86万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1)高純度リン酸化ペプチド精製技術の確立細胞全抽出液の消化物を用いてIMAC担体や金属の選定、バッファー条件や洗浄回数などの系統的な最適化を詳細に行い、リン酸化ペプチド精製の回収率・特異性を大幅に改善した。さらに、Ga-IMACとFe-IMACのリン酸化ペプチド精製の特異性の差を見出し、この特性を利用した、tandemIMAC法を構築することでより網羅性の高い精製技術を構築した。その結果、現在、わずか100ug程度のタンパク質消化物から700種類におよぶリン酸化ペプチドに成功した。さらに、大規模なリン酸化ペプチド解析のために、種々のイオン交換クロマトグラフィー等とIMACの組み合わせを検討し、10000種類以上のリン酸化ペプチドの同定が可能となるシステムを構築した。また、ILAC法やiTRAQ法などの安定同位体標識法による定量技術を用いることで、実際にリン酸化ペプチドを定量可能かどうかを検証し、2検体間の定量的比較(SILAC法)や多検体間の比較(iTRAQ法)による定量法を構築した。2)定量的リン酸化プロテオーム解析の応用上記、定量的なリン酸化ペプチドの大規模解析システムの構築を完了したため、細胞周期やシグナル伝達研究への応用を試みた。細胞周期の解析例としては、非同調細胞とM期同調細胞の比較を行い、3000種類以上のリン酸化ペプチド(約1500種類のタンパク質に相当)の定量を行い、多数のM期特異的なリン酸化を見出した。また、EGF刺激たよって引き起こされるリン酸化の大規模定量解析をiTRAQ法との併用によって遂行し、10000種類にリン酸化の経時変化をとらえることに成功した。これらの大規模データをもとに、各々の新規リン酸化タンパク質について詳細な解析を行うとともに、文献情報とのリンクやモチーフ解析などを行うことで、細胞周期やシグナル伝達における新たな知識発見が可能であることが示された。

1)High purity acidification purification technology to establish the use of whole cell extract digest IMAC support, metal selection, purification conditions and the optimization of the number of washing system, the recovery rate and specificity of acidification purification greatly improved The difference in specificity between Ga-IMAC and Fe-IMAC in purification was found, and the characteristics of Ga-IMAC and Fe-IMAC were constructed by tandemIMAC method. The results are as follows: 100 μ g of protein digest, 700 species of protein, 100 μ g of protein digest, 100 μ g of protein digest, 100 In addition, large-scale analysis and analysis of species, exchange of species, etc. and IMAC's composition and analysis, more than 10000 species of species of species, the same determination, possible construction of species. ILAC method, iTRAQ method, stable isotope identification method, quantitative technique, quantitative comparison between two samples (SILAC method), quantitative comparison between two samples (iTRAQ method), and quantitative method construction. 2)Quantitative analysis of cell cycle parameters and their application in large-scale analysis of cell cycle parameters The analysis of cell cycle was performed in comparison with heteroregulated cells and M phase isoregulated cells. More than 3000 species of cell cycle inhibitors (approximately 1500 species of cell cycle inhibitors) were quantified. Most of the M phase specific cell cycle inhibitors were detected. The method of iTRAQ was successfully applied to the analysis of 10000 species of acid. The large-scale data acquisition, the new regulation, the qualitative analysis, the detailed analysis, the literature information, the analysis, the cell cycle, the new knowledge discovery, the possibility, the possibility.

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

定量的リン酸化プロテオミクスによる細胞内シグナル伝達ネットワーク解析

使用定量磷酸蛋白质组学进行细胞内信号转导网络分析

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
松本雅記;小山田浩二;中山敬一
通讯作者：
中山敬一

Geminin is essential for the development of preimplantation mouse embryos

DOI：
10.1111/j.1365-2443.2006.01019.x
发表时间：
2006-11-01
期刊：
GENES TO CELLS
影响因子：
2.1
作者：
Hara, Kentaro;Nakayama, Keiichi I.;Nakayama, Keiko
通讯作者：
Nakayama, Keiko

Dynamic regulation of ubiquitination and deubiquitination at the central spindle during cytokinesis.

胞质分裂过程中中央纺锤体泛素化和去泛素化的动态调节。

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J. Cell Sci. 121
影响因子：
0
作者：
Mukai;A.
通讯作者：
A.

Blue light-induced autophosphorylation of phototropin is a primary step for signaling

DOI：
10.1073/pnas.0709189105
发表时间：
2008-04-08
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Inoue, Shin-ichiro;Kinoshita, Toshinori;Shimazaki, Ken-ichiro
通讯作者：
Shimazaki, Ken-ichiro

Alteration of intra-pancreatic target-organ specificity by abrogation of Aire in NOD mice