リン酸化ペプチドの網羅的解析のための新技術開発

磷酸化肽综合分析新技术开发

• 批准号: 18016024
• 负责人: 松本 雅記
• 金额: $ 4.86万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18016024/
• 关键词: プロテオミクス; リン酸化; 細胞周期; シグナル伝達; シグナル伝津

1)高純度リン酸化ペプチド精製技術の確立細胞全抽出液の消化物を用いてIMAC担体や金属の選定、バッファー条件や洗浄回数などの系統的な最適化を詳細に行い、リン酸化ペプチド精製の回収率・特異性を大幅に改善した。さらに、Ga-IMACとFe-IMACのリン酸化ペプチド精製の特異性の差を見出し、この特性を利用した、tandemIMAC法を構築することでより網羅性の高い精製技術を構築した。その結果、現在、わずか100ug程度のタンパク質消化物から700種類におよぶリン酸化ペプチドに成功した。さらに、大規模なリン酸化ペプチド解析のために、種々のイオン交換クロマトグラフィー等とIMACの組み合わせを検討し、10000種類以上のリン酸化ペプチドの同定が可能となるシステムを構築した。また、ILAC法やiTRAQ法などの安定同位体標識法による定量技術を用いることで、実際にリン酸化ペプチドを定量可能かどうかを検証し、2検体間の定量的比較(SILAC法)や多検体間の比較(iTRAQ法)による定量法を構築した。2)定量的リン酸化プロテオーム解析の応用上記、定量的なリン酸化ペプチドの大規模解析システムの構築を完了したため、細胞周期やシグナル伝達研究への応用を試みた。細胞周期の解析例としては、非同調細胞とM期同調細胞の比較を行い、3000種類以上のリン酸化ペプチド(約1500種類のタンパク質に相当)の定量を行い、多数のM期特異的なリン酸化を見出した。また、EGF刺激たよって引き起こされるリン酸化の大規模定量解析をiTRAQ法との併用によって遂行し、10000種類にリン酸化の経時変化をとらえることに成功した。これらの大規模データをもとに、各々の新規リン酸化タンパク質について詳細な解析を行うとともに、文献情報とのリンクやモチーフ解析などを行うことで、細胞周期やシグナル伝達における新たな知識発見が可能であることが示された。

1) High-temperature acidizing technology ensures that the total extraction solution of the cell is digested by using the IMAC carrier metal to select the most efficient acidizing equipment of the system, and the performance of the acidizing process is greatly improved. For example, Ga-IMAC, Fe-IMAC, acidizing and acidifying devices, the special features are exported, the features are leveraged, and the tandemIMAC method is applied to the Internet. The result of the experiment, the present, the present, the 100ug level, the degradation rate, the acidizing effect, the acidizing effect and the success rate. For example, large-scale and large-scale chemical acidizing equipment, such as the IMAC system, and more than 10000 kinds of chemical products, such as each other, may be used for the same purpose. The quantitative techniques of diazepam, diazepam, ILAC, diazepam, acidification, SILAC (SILAC), iTRAQ (iTRAQ) and so on were used in quantitative analysis. 2) quantitative acidizing, large-scale analysis, quantitative acidizing, quantitative acidizing. Cell cycle analysis, cell cycle analysis, cell cycle analysis, The EGF stimulation leads to the quantitative analysis of the large scale of the acidizing effect. The iTRAQ method has been successfully applied to the acidizing process in 10000 years. In this paper, the large-scale model is used, the new rules are acidified, the lines are analyzed, the literature information is analyzed, the data are analyzed, and the cell cycle is up to date.

项目成果

定量的リン酸化プロテオミクスによる細胞内シグナル伝達ネットワーク解析

使用定量磷酸蛋白质组学进行细胞内信号转导网络分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 松本 雅記;小山田 浩二;中山 敬一
• 通讯作者: 中山 敬一

Geminin is essential for the development of preimplantation mouse embryos

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2006.01019.x
• 发表时间: 2006-11-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Hara, Kentaro;Nakayama, Keiichi I.;Nakayama, Keiko
• 通讯作者: Nakayama, Keiko

Dynamic regulation of ubiquitination and deubiquitination at the central spindle during cytokinesis.

胞质分裂过程中中央纺锤体泛素化和去泛素化的动态调节。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J. Cell Sci. 121
• 作者: Mukai;A.
• 通讯作者: A.

Alteration of intra-pancreatic target-organ specificity by abrogation of Aire in NOD mice

• DOI: 10.1172/jci26971
• 发表时间: 2006-05-01
• 期刊: JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION
• 影响因子: 15.9
• 作者: Niki, S;Oshikawa, K;Matsumoto, M
• 通讯作者: Matsumoto, M

Blue light-induced autophosphorylation of phototropin is a primary step for signaling

• DOI: 10.1073/pnas.0709189105
• 发表时间: 2008-04-08
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Inoue, Shin-ichiro;Kinoshita, Toshinori;Shimazaki, Ken-ichiro
• 通讯作者: Shimazaki, Ken-ichiro