抗リン酸化ペプチド抗体を用いた高感度カルシニューリン活性測定法の開発と臨床応用

抗磷酸化肽抗体高灵敏钙调神经磷酸酶活性测定方法的开发及临床应用

• 批准号: 18659157
• 负责人: 乾 賢一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659157/
• 关键词: 移植・再生医療; 抗リン酸化ペプチド抗体; 薬効評価; カルシニューリン; ELISA測定法

研究代表者等はこれまでに、生体肝移植患者において、シクロスポリンやタクロリムスの標的分子であるカルシニューリンの酵素活性が、これら薬物の免疫抑制効果の指標となり得ることを明らかにしてきた。本研究では、臨床応用可能な迅速かつ高感度な新規カルシニューリン活性測定法の開発を目指して、ELISA法を用いた測定系について検討した。現在までに、カルシニューリンの特異的基質であるリン酸化RIIペプチドに対する抗リン酸化ペプチド抗体の作成に成功し、さらに抗体の特異性が確認された。続いて、抗リン酸化RIIペプチド抗体をプレートに固相化し、FLAG付リン酸化RIIペプチドを標準物質として、サンドイッチELISA測定系を確立した。FLAG付リン酸化RIIペプチドの定量性は、0.125-4ng/mLの範囲であった。本法は、カルシニューリンによるリン酸化RIIペプチドの脱リン酸化反応(ステップ1)と、FLAG付リン酸化RIIペプチドによる反応終了液中に含まれるリン酸化RIIペプチドの定量(ステップ2)を行うことを特徴とし、反応前後のリン酸化RIIペプチドの物質収支からカルシニューリンの脱リン酸化活性が算出できる。本年度は、リン酸化RIIペプチド定量のための条件検討を実施した。まず、ステップ1の停止液のステップ2に対する影響を調べた結果、常用の5%トリクロロ酢酸/0.lMリン酸二水素カリウム溶液を用いた場合、FLAG付リン酸化RIIペプチド(4ng/mL)の検出が不可能であった。そこで次に、5mM EGTA(カルシニューリンの阻害剤)をステップ1の停止液として用いた場合、ステップ2には影響せず、FLAG付リン酸化RIIペプチドの検出が可能であることが示された。今後、開発したnon-RI ELISA測定系の臨床応用に向けて、カルシニューリン活性測定の最適化及び全自動化を目指す予定である。

Research representatives and others have expressed concern about the enzyme activity of target molecules in liver transplant patients and the indicators of immunosuppressive effects of drugs. This study indicates that clinical use may be rapid in the development of new high sensitivity assays and in the development of ELISA assays. Now, the specificity of the antibody has been confirmed by the successful preparation of the anti-RII antibody against the specific matrix of RII. The ELISA system was established for the determination of anti-RII antibodies by solid-phase analysis and FLAG analysis. FLAG acidified RII was quantified in the range of 0.125-4ng/mL. This method is used to calculate the activity of deacidifying RII by determining the amount of deacidifying RII in the final reaction solution containing deacidifying RII in the final reaction solution. This year, we will continue to review the conditions for the release of RII. The results of the adjustment of the influence of the stop solution of ST1 on ST2 were as follows: When the commonly used 5% TCA/0.1M TCA dihydrate solution was used, the detection of FLAG TCA RII solution (4ng/mL) was impossible. In addition, 5mM EGTA(inhibitor) can be used as a stop solution for temperature 1 and temperature 2, and FLAG can be used as a stop solution for temperature 2 and temperature 3. In the future, the development of non-RI ELISA assays is expected to be optimized and fully automated for clinical use.

项目成果

Distinct effects of omeprazole and rabeprazole on the tacrolimus blood concentration in a kidney transplant recipient

• DOI: 10.2133/dmpk.22.441
• 发表时间: 2007-01-01
• 期刊: DRUG METABOLISM AND PHARMACOKINETICS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Takahashi, Kazushige;Yano, Ikuko;Inui, Ken-ichi
• 通讯作者: Inui, Ken-ichi

Population pharmacokinetic and pharmacogenomic analysis of tacrolimus in pediatric living-donor…

他克莫司在儿科活体捐赠者中的群体药代动力学和药物基因组学分析……

• 发表时间: 2006
• 期刊: Clin.Pharmacol.Ther. 21(6)
• 作者: Fukudo;M.;et al.
• 通讯作者: et al.

Relation between mRNA Expression Level of MDR1/ABCB1 in Blood Cells and Required Level of Tacrolimus in Pediatric Living-donor Liver Transplantation.

儿童活体肝移植血细胞中MDR1/ABCB1 mRNA表达水平与他克莫司所需水平的关系。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Pharmcol Exp Ther. (in press)
• 作者: Goto;M;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Impact of intestinal MDR1 and CYP3A5 on the oral clearance of tacrolimus in adult living-donor liver transplant patients.

肠道 MDR1 和 CYP3A5 对成人活体肝移植患者他克莫司口服清除率的影响。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Pharmacogenet. Genomics (in press)
• 作者: Fukudo;M.;Yano;I.;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Pharmacogenomics of Immunosuppressants

• DOI: 10.1007/978-981-15-3895-7_5
• 发表时间: 2020
• 期刊: Pharmacogenomics in Precision Medicine
• 作者: Xiaoyan Qiu;Zhuo Wu;Qinxia Xu;Chang-cheng Sheng;Z. Jiao