Elucidation of the pathophysiology of OA fibrosis and establishment of therapeutic methods using innovative imaging technology and single-cell analysis
利用创新成像技术和单细胞分析阐明 OA 纤维化的病理生理学并建立治疗方法
基本信息
- 批准号:21H03056
- 负责人:
- 金额:$ 11.15万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
- 财政年份:2021
- 资助国家:日本
- 起止时间:2021-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究では、変形性関節症(OA)の線維軟骨形成について、慢性炎症のキープロセスである線維化(fibrosis)の視点でアプローチし、革新的イメージング技術を駆使した細胞動態解析によって、線維芽細胞の起源としてCAR(CXCL12-abundant reticular)細胞、線維化を増長する悪玉線維芽細胞としてTHY1陽性細胞の関与を明らかにする。さらに、一細胞解析を用いた遺伝子発現プロファイルによって、線維化に関わる多様な細胞の新たなサブタイプを同定し、その制御に関わる細胞間ネットワークを明らかにする。in vivoの細胞動態実験については、特殊なウインドウを開発し、マウスに移植したオルガノイド細胞を長期間観察する実験系を確立した。I型コラーゲンプロモーター支配下に緑色蛍光タンパク質(GFP)が発現するマウス(ColI-GFPマウス)、橙色蛍光タンパク質(Kusabira-Orange; KO)をCXCL12 locusにノックインしたマウス(CAR-Orangeマウス)とTHY1プロモーター支配下に黄色蛍光タンパク質(YFP)が発現するマウス(H-lineマウス)については、それぞれ全身での発現解析を進めた。OA手術については、術後の2光子励起蛍光顕微鏡を用いた生体イメージングの問題点解決を諮ったが、関節腔が狭く、対物レンズの挿入が困難で、関節面の一部しか観察できなかった。SHGによるコラーゲンイメージングについては偏光方向イメージングでシグナル強度の変化を定量化した。組織透明化については、透明化の効果が弱かったLUCID法に比べCUBIC-L/R法では十分な透明化効果があることがわかった。さらに前年度に引き続き2光子励起ライトシート顕微鏡を用いた高精細3Dイメージングシステム構築を進めた。一細胞解析のための準備については、細胞分離と解析の条件設定をさらに進めた。
This study aims to clarify the relationship between the development of linear cartilage in OA, the development of fibrosis in chronic inflammation, and the development of THY1-positive cells by using innovative management techniques for cell dynamics analysis. In addition, a cell analysis system uses a gene to develop new cell types, such as DNA, DNA, In vivo, cell dynamics are monitored for long periods of time, and the system is established for specific cell development and transplantation. Green fluorescent protein (GFP) appears under the control of type I fluorescent protein (ColI-GFP), orange fluorescent protein (Kusabira-Orange; KO), yellow fluorescent protein (YFP) appears under the control of type I fluorescent protein (CAR-Orange) and THY1 fluorescent protein (YFP). OA surgery, post-operative 2-photon excitation, microscopy, biological analysis, problem-solving, joint cavity narrowing, object insertion difficulties, part of the joint surface SHG: Quantification of polarization direction and intensity. The LUCID method is more effective than the CUBIC-L/R method. In the past year, the use of high-resolution 3D micro-mirrors has been improved. A cell analysis and analysis of preparation, cell separation and analysis of the conditions set up
项目成果
期刊论文数量(14)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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- DOI:
- 发表时间:2021
- 期刊:
- 影响因子:0
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- 通讯作者:今村 健志
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- 发表时间:2021-03
- 期刊:
- 影响因子:19
- 作者:Minami Takezaki;R. Kawakami;S. Onishi;Yasutaka Suzuki;J. Kawamata;Takeshi Imamura;Shingo Hadano;Shigeru Watanabe;Y. Niko
- 通讯作者:Minami Takezaki;R. Kawakami;S. Onishi;Yasutaka Suzuki;J. Kawamata;Takeshi Imamura;Shingo Hadano;Shigeru Watanabe;Y. Niko
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- DOI:10.1039/d1tb02728j
- 发表时间:2022-02-14
- 期刊:
- 影响因子:7
- 作者:Inoue, Kazuki;Kawakami, Ryosuke;Niko, Yosuke
- 通讯作者:Niko, Yosuke
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