脳腸軸を介し脳を活性化するポリフェノールの探索

マウスにロスマリン酸（RA）を経口投与し、投与後12時間まで経時的に血漿および各臓器を採取した。採取した血漿および各臓器に含まれるRAおよびその代謝物であるカフェ酸（CAA）、フェルラ酸（FA）、クマル酸、ヒドロ-m-クマリン酸、ロスマリン酸メチル（RM）をLC-MS/MSを用いて測定した。血漿および臓器抽出液は、脱抱合化酵素（グルクロニダーゼおよびスルファターゼを含む）による脱抱合処理し測定することで、抱合体とアグリコンの総濃度を測定した。また脱抱合処理を行っていないサンプルを測定し、アグリコン濃度とした。血漿および各臓器のホモジナイズ溶液から得られた上清と脱抱合化酵素溶液を混合し、37℃で45分間振盪しながらインキュベートした。その後0.83 M酢酸メタノールを加え、12, 000 ×g、4℃で10分間遠心分離した。得られた上清をMillex-LHフィルターにて濾過し、5 μLを測定に供した。LC-MS/MS は Silex社製の 3200Q TRAPを使用した。本研究で使用したLC-MS/MSにおける、RAおよび代謝物の検出限界濃度の範囲は、10^-5 ～10^-2 μMであった。血漿中ではRA、CAA、FAのみが検出され、RA濃度が最も高かった。脳ではRAが検出されなかった一方、代謝物が検出された。肝臓ではRA、CAA、FA、およびRMが検出され、RMが最も高濃度で検出された。以上の結果から、RAは経口摂取後、速やかに代謝を受け、存在する化合物は臓器ごとに異なることが明らかとなった。

マウスにロスマリン酸（RA）を経口投与し、投与後12時間まで経時的に血漿および各臓器を採取した。採取した血漿および各臓器に含まれるRAおよびその代謝物であるカフェ酸（CAA）、フェルラ酸（FA）、クマル酸、ヒドロ-m-クマリン酸、ロスマリン酸メチル（RM）をLC-MS/MSを用いて測定した。血漿および臓器抽出液は、脱抱合化酵素（グルクロニダーゼおよびスルファターゼを含む）による脱抱合処理し測定することで、抱合体とアグリコンの総濃度を測定した。また脱抱合処理を行っていないサンプルを測定し、アグリコン濃度とした。血漿および各臓器のホモジナイズ溶液から得られた上清と脱抱合化酵素溶液を混合し、37℃で45分間振盪しながらインキュベートした。その後0.83 M酢酸メタノールを加え、12, 000 ×g、4℃で10分間遠心分離した。得られた上清をMillex-LHフィルターにて濾過し、5 μLを測定に供した。LC-MS/MS は Silex社製の 3200Q TRAPを使用した。本研究で使用したLC-MS/MSにおける、RAおよび代謝物の検出限界濃度の範囲は、10^-5 ～10^-2 μMであった。血漿中ではRA、CAA、FAのみが検出され、RA濃度が最も高かった。脳ではRAが検出されなかった一方、代謝物が検出された。肝臓ではRA、CAA、FA、およびRMが検出され、RMが最も高濃度で検出された。以上の結果から、RAは経口摂取後、速やかに代謝を受け、存在する化合物は臓器ごとに異なることが明らかとなった。