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Analysis of stemness, aging and carcinogenesis using hematopoietic stem cell ex vivo amplification system

利用造血干细胞离体扩增系统分析干性、衰老和致癌作用

基本信息

批准号：
20H05695
负责人：
中内啓光
金额：
$ 126.96万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University (2022-2023)The University of Tokyo (2020-2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-08-31 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

マウス造血幹細胞長期培養後において造血幹細胞機能と相関する細胞表面マーカーを評価しこれを同定した。また、培養条件の最適化によって造血幹細胞分画のさらなる増殖が得られた。新たに同定した培養後造血幹細胞分画を用いてRNAシークエンスを用いた網羅的遺伝子発現解析を開始しており、現在解析を進めている。マウス造血幹細胞の長期培養により遺伝子変異が集積するかを評価するため、造血幹細胞を2ヶ月間培養し、遺伝子変異の集積をwhole exon sequencingを用いて経時的に評価したところ、長期の造血幹細胞の培養が遺伝子変異の蓄積と相関することが明らかとなった。造血幹細胞の網羅的遺伝子ノックアウトスクリーニングとしてCas9タンパク質を発現する遺伝子改変マウスから造血幹細胞を採取し長期培養によって増殖しノックアウトスクリーニングを行った。同時にCRISPR gRNAライブラリー導入後に造血幹細胞移植を行い、レシピエントマウス体内で再構築されたドナー血液細胞中のgRNAの頻度の解析から、生体内での再構築能に影響を与える遺伝子ノックアウトの探索を行っている。得られた候補遺伝子のノックアウトによって表現型が得られるかの確認を進めている。これまで得られたマウス造血幹細胞を用いた培養方法最適化の知見をヒト造血幹細胞に応用したところ、ヒト臍帯血CD34陽性細胞は2-3週間程度その幹細胞性を維持したまま培養、増殖が可能であることが確認できた。さらに培養後造血幹細胞の表面抗原マーカーの発現においてヒト臍帯血CD34陽性細胞とマウス造血幹細胞とで同様の表面タンパク質の発現が確認できた。さらなる培養の最適化を進めるとともに、その他の表面抗原マーカーがヒト造血幹細胞の培養においても有効なマーカーとなりうるかどうか検討を進めている。

After long-term culture of hematopoietic progenitor cells, the hematopoietic cells can be cultured for a long time. The conditions of culture and cultivation are optimized. The hematopoietic cells are divided into two parts. After the new computer is selected, the hematopoietic cells will be separated and analyzed using the sub-users of the RNA user network. Now the analysis starts and the analysis is now in progress. Long-term cultivation of hematopoietic progenitor cells, long-term cultivation of haematopoietic cells, long-term cultivation of hematopoietic progenitor cells, long-term cultivation of hematopoietic cells, long-term culture of hematopoietic cells, The children of the hematopoietic cell network are not affected by the hematopoietic cell network. The hematopoietic stem cells are collected from the Cas9 cells of the hematopoietic cell network. At the same time, after the entry of CRISPR gRNA into the hematopoietic cell transplantation program, the gRNA concentration in the blood cell was analyzed and analyzed in vivo after hematopoietic cell transplantation. in the same time, after the hematopoietic cell transplantation was carried out, the gRNA concentration in the blood cell was analyzed, and the results were analyzed in vivo. Please confirm that you are in the process of receiving information on the table type. By using the method of cell culture, we have been informed that the hematopoietic cells have been used to maintain the culture of human hematopoietic cells at intervals of 2-3 degrees, and that it is possible to confirm the results of CD34 culture and culture. After incubation, the hematopoietic cell surface antigen was detected, the blood CD34 was detected, the hematopoietic cell was the same as the hematopoietic cell, the surface antigen was confirmed. In order to improve the quality of life, we need to learn more about the development of hematopoietic cells, hematopoietic cells and hematopoietic cells.