マウス造血幹細胞体外増幅系を用いた幹細胞性・加齢・発癌機構の解析

利用小鼠造血干细胞体外扩增系统分析干细胞、衰老和致癌机制

• 批准号: 20H00538
• 负责人: 中内 啓光
• 金额: $ 29.12万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H00538/
• 关键词: 造血幹細胞; 体外増幅; 加齢; クローン性造血; 発癌; 遺伝子ノックアウトスクリーニング; マルチオミックス解析

成体マウスより採取したマウス造血幹細胞を体外増幅し、表面抗原に対する抗体パネルにより多重染色を行い、イムノフェノタイプ別に体外増幅培養を行い、同種造血幹細胞移植を実施し、幹細胞および各種前駆細胞の機能的分画を評価した。現在、これらのサンプルのRNA-seqを実施中である。加齢・発癌機構の解析に関しては、Dnmt3a、Tet2、Asxl1などの変異型マウスのコロニーを導入予定であったが、COVID19の影響で供給依頼先の研究活動が一時停止したため、延期となった。野生型マウス造血幹細胞への候補遺伝子破壊実験を行い、期待通り、ex vivoでもクローン性造血などの表現型が得られることを確認し、現在全ゲノム解析・エピゲノム解析などを実施中である。また遺伝子ノックアウトスクリーニングに関しては、現在、機能群別のgRNAライブラリをウイルスベクター化し、マウス造血幹細胞移植実験を実施中である。

在体外扩增了从成年小鼠收集的小鼠造血干细胞，用针对表面抗原的抗体面板进行多种染色，每种免疫表型的体外扩增培养物，同种异体血型干细胞，并评估了干细胞和各种祖细胞的功能。目前，正在对这些样品进行RNA-Seq。关于对衰老和癌变的分析，计划引入突变小鼠（例如DNMT3A，TET2和ASXL1）的菌落，但由于COVID19的影响，该公司被推迟为供应商要求的研究活动。我们进行了有关野生型小鼠造血干细胞的候选基因破坏的实验，正如预期的那样，我们证实了诸如克隆造血剂之类的表型也可以在体内获得，并且目前正在进行全基因组和表观基因组分析。关于基因敲除筛查，目前，我们目前正在使用每个功能组的GRNA文库进行小鼠造血干细胞移植实验，以转化为病毒载体。

项目成果

In vivo and ex vivo haematopoietic stem cell expansion.

体内和离体造血干细胞扩增。

• DOI: 10.1097/moh.0000000000000593
• 发表时间: 2020
• 期刊: Current opinion in hematology
• 影响因子: 3.2
• 作者: Yamamoto,Ryo;Wilkinson,AdamC;Nakauchi,Hiromitsu
• 通讯作者: Nakauchi,Hiromitsu

In vivo clonal analysis of aging hematopoietic stem cells.

• DOI: 10.1016/j.mad.2020.111378
• 发表时间: 2020-12
• 期刊: Mechanisms of ageing and development
• 影响因子: 5.3
• 作者: Yamamoto R;Nakauchi H
• 通讯作者: Nakauchi H

Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo.

• DOI: 10.1038/s41576-020-0241-0
• 发表时间: 2020-09
• 期刊: Nature reviews. Genetics
• 作者: Wilkinson AC;Igarashi KJ;Nakauchi H
• 通讯作者: Nakauchi H

Stabilizing hematopoietic stem cells in vitro.

• DOI: 10.1016/j.gde.2020.05.035
• 发表时间: 2020-10
• 期刊: Current opinion in genetics & development
• 影响因子: 4
• 作者: Wilkinson AC;Nakauchi H
• 通讯作者: Nakauchi H