マウス造血幹細胞体外増幅系を用いた幹細胞性・加齢・発癌機構の解析

利用小鼠造血干细胞体外扩增系统分析干细胞、衰老和致癌机制

• 批准号: 20H00538
• 负责人: 中内 啓光
• 金额: $ 29.12万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H00538/
• 关键词: 造血幹細胞; 体外増幅; 加齢; クローン性造血; 発癌; 遺伝子ノックアウトスクリーニング; マルチオミックス解析

成体マウスより採取したマウス造血幹細胞を体外増幅し、表面抗原に対する抗体パネルにより多重染色を行い、イムノフェノタイプ別に体外増幅培養を行い、同種造血幹細胞移植を実施し、幹細胞および各種前駆細胞の機能的分画を評価した。現在、これらのサンプルのRNA-seqを実施中である。加齢・発癌機構の解析に関しては、Dnmt3a、Tet2、Asxl1などの変異型マウスのコロニーを導入予定であったが、COVID19の影響で供給依頼先の研究活動が一時停止したため、延期となった。野生型マウス造血幹細胞への候補遺伝子破壊実験を行い、期待通り、ex vivoでもクローン性造血などの表現型が得られることを確認し、現在全ゲノム解析・エピゲノム解析などを実施中である。また遺伝子ノックアウトスクリーニングに関しては、現在、機能群別のgRNAライブラリをウイルスベクター化し、マウス造血幹細胞移植実験を実施中である。

Adult hematopoietic stem cell transplantation: in vitro amplification, surface antigen antibody production, multiple staining, in vitro amplification, allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, and functional characterization of stem cells. Now, the RNA-seq is implemented. The analysis of cancer development mechanism is related to the introduction of Dnmt3a, Tet2, Asxl1 and the impact of COVID19. Wild type hematopoietic stem cell candidates are in the process of being tested, expected to be tested, ex vivo, ex vivo, In the process of hematopoietic stem cell transplantation, we have developed a new type of hematopoietic stem cell transplantation system.

项目成果

In vivo and ex vivo haematopoietic stem cell expansion.

体内和离体造血干细胞扩增。

• DOI: 10.1097/moh.0000000000000593
• 发表时间: 2020
• 期刊: Current opinion in hematology
• 影响因子: 3.2
• 作者: Yamamoto,Ryo;Wilkinson,AdamC;Nakauchi,Hiromitsu
• 通讯作者: Nakauchi,Hiromitsu

In vivo clonal analysis of aging hematopoietic stem cells.

• DOI: 10.1016/j.mad.2020.111378
• 发表时间: 2020-12
• 期刊: Mechanisms of ageing and development
• 影响因子: 5.3
• 作者: Yamamoto R;Nakauchi H
• 通讯作者: Nakauchi H

Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo.

• DOI: 10.1038/s41576-020-0241-0
• 发表时间: 2020-09
• 期刊: Nature reviews. Genetics
• 作者: Wilkinson AC;Igarashi KJ;Nakauchi H
• 通讯作者: Nakauchi H

Stabilizing hematopoietic stem cells in vitro.

• DOI: 10.1016/j.gde.2020.05.035
• 发表时间: 2020-10
• 期刊: Current opinion in genetics & development
• 影响因子: 4
• 作者: Wilkinson AC;Nakauchi H
• 通讯作者: Nakauchi H