造血幹細胞をニッシェに導くホーミングレセプターのクローニング

克隆引导造血干细胞到达微环境的归巢受体

• 批准号: 14657239
• 负责人: 中内 啓光
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657239/
• 关键词: 造血幹細胞; ニッシェ; ホーミング

昨年度は骨髄移植後の造血幹細胞の骨髄への到達状況について表面マーカーを利用して定量的に解析し、移植後6時間から12時間後に骨髄中に再現性を持ってGFP陽性c-Kit+Sca-1+Lin-(KSL)細胞の出現ピークが観察されることを明らかにした。また、脾臓には移植直後からGFP陽性KSL細胞の集積が認められたが、明確なピークは存在しなかった。しかし、これはあくまで造血前駆細胞をマーカーで見ているだけであり、本当に移植後の造血幹細胞に骨髄出現ピークがあるかどうかは不明であった。そこで今年度は機能的な側面から造血前駆細胞のホーミングを解明することを目的として研究を進めた。FACSで骨髄細胞中のCD34-KSL細胞(造血幹細胞)、CD34+KSLFLT3+細胞(造血前駆細胞)、CD34+KSLFLT3-細胞(より未分化な造血前駆細胞)の3つの分画の細胞をソーティングし、それぞれ200個の細胞を致死量放射線照射したマウスに移植した。移植1日後、2日後、3日後に脾臓細胞および骨髄細胞を回収してコロニーアッセイを行ったところ、いずれの分画も移植1日後では脾臓にのみコロニー産生細胞の存在を認めた。CD34-KSL細胞およびCD34+KSLFLT3-細胞を移植した群では2日目から骨髄にコロニー産生細胞を認め、3日目にかけてその数は増加する傾向が見られた。一方、CD34+KSLFL3+細胞を移植した群では脾臓でのコロニー産生細胞が移植1日後には認められたものの、2日目以降は減少した。骨髄には1日目2日目ともに頃に産生細胞を認めなかったが3日目よりその数は急増する傾向が認められた。このように、造血幹細胞や未分化な造血前駆細胞のホーミングはいきなり骨髄に行くよりも一度脾臓に行ってある程度分裂してから骨髄に移動する可能性が強く示唆される結果となった。一方で、造血前駆細胞の分化段階によってホーミングの場所が異なる可能性も示唆されており、ホーミングレセプター発現クローニングに用いる細胞の種類や細胞を回収する組織について貴重な情報が得られた。

The presence of GFP positive c-Kit+Sca-1+Lin-(KSL) cells in bone marrow was observed 6 hours after transplantation and 12 hours after transplantation. The accumulation of GFP-positive KSL cells after transplantation was confirmed and confirmed. Hematopoietic stem cells appear after transplantation. This year, the function of hematopoietic progenitor cells was studied. FACS detected CD34-KSL cells (hematopoietic stem cells), CD34 + KSLFLT3 + cells (hematopoietic progenitor cells), CD34 + KSLFLT3-cells (undifferentiated hematopoietic progenitor cells), and 3 separate cells. 1 day, 2 days and 3 days after transplantation, spleen cells and bone marrow cells were recovered, and the existence of spleen cells and bone marrow cells was recognized. CD34-KSL cells and CD34 + KSLFLT3-cells tended to increase in the number of bone-producing cells after transplantation on day 2 and day 3 respectively. One day after transplantation, CD34 + KSL3 + cells were transplanted and the number of cells produced decreased. The number of cells produced in the first two days of the study increased rapidly. The possibility of hematopoietic stem cells and undifferentiated hematopoietic progenitor cells moving to the first degree of differentiation is strong. In one aspect, the differentiation stage of hematopoietic progenitor cells may be different from that of other tissues, and valuable information may be obtained from the differentiation stage of hematopoietic progenitor cells.

项目成果

Kojima H, Kanada H, Shimizu S, Kasama E, Shibuya K, Nakauchi H, Nagasawa T, Shibuya A.: "CD226 mediates platelet and megakaryocytic cell adhesion to vascular endothelial cells."J Biol Chem.. 278. 36748-36753 (2003)

Kojima H、Kanada H、Shimizu S、Kasama E、Shibuya K、Nakauchi H、Nagasawa T、Shibuya A.：“CD226 介导血小板和巨核细胞与血管内皮细胞的粘附。”J Biol Chem.. 278. 36748-36753 (

Hirasawa R., et al.: "Essential and Instructive Roles of GATA Factors in Eosinophil Development"J Exp Med. 195. 1379-1386 (2002)

Hirasawa R. 等人：“GATA 因子在嗜酸性粒细胞发育中的重要和指导性作用”J Exp Med。

SuzukiA, et al.: "Establishment of clonal colony-forming assay system for pancreatic stem/progenitor cells"Cell Transplant. 11. 451-453 (2002)

SuzukiA 等人：“胰腺干细胞/祖细胞克隆集落形成测定系统的建立”细胞移植。

Ema, H, Nakauchi H.: ""Homing to Niche," a new criterion for hematopoietic stem cells?"Immunity.. 20. 1-2 (2004)

Ema, H, Nakauchi H.：““归巢到利基”，造血干细胞的新标准？”Immunity.. 20. 1-2 (2004)

Osawa M., et al.: "Erythroid expansion mediated by the Gfi-1B zinc finger protein : role in normal hematoroiesis"Blood. 100. 2769-2777 (2002)

Osawa M. 等人：“Gfi-1B 锌指蛋白介导的红细胞扩张：在正常造血中的作用”血液。