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レンチウイルスベクターによるHIV感染症の遺伝子治療

使用慢病毒载体治疗 HIV 感染的基因治疗

基本信息

批准号：
13015201
负责人：
中内啓光
金额：
$ 1.47万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13015201/
关键词：
エイズ HIV レンチウイルスベクター遺伝子治療造血幹細胞 CCR5 細胞内抗体

项目摘要

本研究は造血幹細胞をターゲットとしたHIV感染症の遺伝子治療を目的とする。具体的には、HIVのCCR5コレセプターに対する細胞内抗体遺伝子を造血幹細胞に導入し移植することにより、幹細胞由来のすべての血液細胞内で抗原抗体反応がおこり、CCR5が細胞表面に発現されないためHIVの感染増殖が阻害されることを期待するものである。すでに米国の共同研究者が、抗CCR5細胞内抗体をCCR5陽性T細胞株(PM1)に発現させることによりin vitroでHIVの増殖を阻害することに成功している。一方、近年まで造血幹細胞への遺伝子導入は非常に困難であったが、レンチウイルスベクターの開発により造血幹細胞をターゲットとした遺伝子治療が現実的なものとなってきている。そこで、臨床応用に向けてベクターの安全性を高めるため、パッケージングコンストラクトからtat, vif, vpr, vpu, nef遺伝子を除き、ベクターのLTRプロモーター活性をなくした第3世代ベクターを作製した。このベクターは、ヒト造血幹細胞にサイトカインによる増殖刺激なしで、これまでのベクターと同等以上に高い効率で遺伝子導入できることがNOD/SCID免疫不全マウスを用いたin vivoの系で確認された。さらに第3世代ベクターは、ヒトよりもはるかに純度の高いマウス造血幹細胞にも高い効率で遺伝子導入できること、WPRE(woodchuck hepatitis virus posttranscriptionol regulatory element)を挿入したベクターでは発現レベルが飛躍的に上昇すること、cPPT(central polypurine tract)sequenceを挿入することにより導入効率が上がることがわかった。また、CMV,PGK, EF-1α各プロモーターを比較検討した結果、EF-1αが最もすぐれていることが判明した。現在、抗CCR5細胞内抗体遺伝子を組み込んだ第3世代レンチウイルスベクターを作製し、臨床応用の前段階としてサルを用いたin vivoでの抗HIV効果を検討中である。

The aim of this study is to develop hematopoietic stem cells for the treatment of HIV infection. Specifically, CCR5 cells are targeted for intracellular antibody expression, hematopoietic stem cell transplantation, stem cell origin, and intracellular antigen antibody expression. CCR5 cells are targeted for cell surface development, and HIV infection and proliferation is inhibited. Our co-investigators found that CCR5 positive T cell line (PM1), an anti-CCR5 intracellular antibody, was successfully developed in vitro to inhibit HIV proliferation. In recent years, the introduction of hematopoietic stem cell gene has been very difficult. It is very difficult to develop hematopoietic stem cell gene therapy. In addition, the LTR activity in clinical use is controlled by the third generation of patients. This is the first time that we've seen a human hematopoietic stem cell transplant in vivo, and we've seen a human hematopoietic stem cell transplant in vivo. In the third generation, the purity of hematopoietic stem cells is high, and the introduction rate of WPRE(woodchuck hepatitis virus posttranscriptionol regulatory element) is high. The introduction rate of cPPT(central polypurine tract)sequence is high. The results of the comparative study of CMV,PGK and EF-1α indicate that EF-1α is the most important factor. At present, the anti-CCR5 intracellular antibody gene group has been divided into the third generation, the first stage of clinical use, and the anti-HIV effect in vivo has been discussed.