レンチウイルスベクターによるHIV感染症の遺伝子治療

使用慢病毒载体治疗 HIV 感染的基因治疗

• 批准号: 13015201
• 负责人: 中内 啓光
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13015201/
• 关键词: エイズ; HIV; レンチウイルス; ベクター; 遺伝子治療; 造血幹細胞; CCR5; 細胞内抗体

本研究は造血幹細胞をターゲットとしたHIV感染症の遺伝子治療を目的とする。具体的には、HIVのCCR5コレセプターに対する細胞内抗体遺伝子を造血幹細胞に導入し移植することにより、幹細胞由来のすべての血液細胞内で抗原抗体反応がおこり、CCR5が細胞表面に発現されないためHIVの感染増殖が阻害されることを期待するものである。すでに米国の共同研究者が、抗CCR5細胞内抗体をCCR5陽性T細胞株(PM1)に発現させることによりin vitroでHIVの増殖を阻害することに成功している。一方、近年まで造血幹細胞への遺伝子導入は非常に困難であったが、レンチウイルスベクターの開発により造血幹細胞をターゲットとした遺伝子治療が現実的なものとなってきている。そこで、臨床応用に向けてベクターの安全性を高めるため、パッケージングコンストラクトからtat, vif, vpr, vpu, nef遺伝子を除き、ベクターのLTRプロモーター活性をなくした第3世代ベクターを作製した。このベクターは、ヒト造血幹細胞にサイトカインによる増殖刺激なしで、これまでのベクターと同等以上に高い効率で遺伝子導入できることがNOD/SCID免疫不全マウスを用いたin vivoの系で確認された。さらに第3世代ベクターは、ヒトよりもはるかに純度の高いマウス造血幹細胞にも高い効率で遺伝子導入できること、WPRE(woodchuck hepatitis virus posttranscriptionol regulatory element)を挿入したベクターでは発現レベルが飛躍的に上昇すること、cPPT(central polypurine tract)sequenceを挿入することにより導入効率が上がることがわかった。また、CMV,PGK, EF-1α各プロモーターを比較検討した結果、EF-1αが最もすぐれていることが判明した。現在、抗CCR5細胞内抗体遺伝子を組み込んだ第3世代レンチウイルスベクターを作製し、臨床応用の前段階としてサルを用いたin vivoでの抗HIV効果を検討中である。

The purpose of this study is for the treatment of を by <s:1> hematopoietic stem cells をタ をタ ゲットと <s:1> た た of HIV infection 伝. Specific に は, HIV の CCR5 コ レ セ プ タ ー に す seaborne る intracellular antibody heritage 伝 son す に import し を hematopoietic stem cells transplantation る こ と に よ り, stem cell origin の す べ て の で blood cell antigen antibody against 応 が お こ り, CCR5 が cell surface に 発 now さ れ な い た が め の HIV infection raised colonization resistance against さ れ る こ と を expect す る も の Youdaoplaceholder0. す で に m の Shared researchers が, CCR5 intracellular antibody を CCR5 positive T cell lines (PM1) に 発 now さ せ る こ と に よ り in vitro で を の raised colonization resistance against HIV す る こ と に successful し て い る. Side, in recent years, ま で hematopoietic stem cells へ の heritage 伝 son import は very difficult に で あ っ た が, レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー の open 発 に よ り hematopoietic stem cells を タ ー ゲ ッ ト と し た heritage 伝 が son treatment presently be な も の と な っ て き て い る. そ こ で, clinical 応 に to け て ベ ク タ ー の security を high め る た め, パ ッ ケ ー ジ ン グ コ ン ス ト ラ ク ト か ら tat, 2 vif is based, VPR, vpu, nef heritage 伝 son を except き, ベ ク タ ー の LTR プ ロ モ ー タ ー active を な く し た third generation ベ ク タ ー を cropping し た. こ の ベ ク タ ー は, ヒ ト hematopoietic stem cells に サ イ ト カ イ ン に よ る raised colonization stimulus な し で, こ れ ま で の ベ ク タ ー と equally high above に い sharper rate で heritage 伝 son import で き る こ と が NOD/SCID immune insufficiency マ ウ ス を with い た in vivo の is で confirm さ れ た. さ ら に third generation ベ ク タ ー は, ヒ ト よ り も は る か に の high purity い マ ウ ス hematopoietic stem cells に も high い sharper rate で heritage 伝 son import で き る こ と, WPRE (a woodchuck hepatitis virus get posttranscriptionol regulatory Element) を scions into し た ベ ク タ ー で は 発 now レ ベ ル が leap に rising す る こ と, cPPT (central polypurine tract) sequence を scions into す る こ と に よ り import working rate on が が る こ と が わ か っ た. ま た, CMV, PGK, EF - 1 alpha each プ ロ モ ー タ ー を compare beg し 検 た results, EF - 1 alpha が も す ぐ れ て い る こ と が.at し た. Now, anti CCR5 intracellular antibodies but 伝 を group み 込 ん だ third generation レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を for clinical 応 し, front order と の し て サ ル を with い た in vivo で の anti-hiv unseen fruit を 検 win in で あ る.

项目成果

Hiromitsu Nakauchi, et al.: "Quantitative assessment of the stem cell self-renewal capacity."Ann N Y Acad Sci. 938巻. 18-25 (2001)

Hiromitsu Nakauchi 等人：“干细胞自我更新能力的定量评估。”Ann N Y Acad Sci。938. 18-25 (2001)

Zhou S, et al.: "The ABC transporter Bcrp1/ABCG2 is expressed in a wide variety of stem cells and is a molecular determinant of the side-population phenotype."Nat Med. 7巻. 1028-1034 (2001)

Zhou S 等人：“ABC 转运蛋白 Bcrp1/ABCG2 在多种干细胞中表达，是侧群表型的分子决定因素。”Nat Med 第 7 卷，1028-1034。

Tahara-Hanaoka, S., Sudo, K., et al.: "Lentiviral vector-mediated transduction of murine CD34^-hematopoietic stem cells"Exp. Hematol.. 30巻. 11-17 (2002)

Tahara-Hanaoka，S.，Sudo，K.，等人：“慢病毒载体介导的鼠 CD34+造血干细胞的转导”Exp. Hematol.. 30. 11-17 (2002)

Kaneko S, et al.: "Simplified Retroviral Vector GCsap with Mirine Stem Cell Virus Long Terminal Repeat Allows High and Continued Expression of Enhanced Green Flouresoent Protein by Human Hematopoietic Progenitors Engrafted in Nonobase Diabetic/Severe Comb

Kaneko S 等人：“带有 Mirine 干细胞病毒长末端重复序列的简化逆转录病毒载体 GCsap 允许移植到非碱基糖尿病/重度梳中的人类造血祖细胞持续高表达增强型 Green Flouresoent 蛋白