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薬剤誘導性アポトーシス関連遺伝子用いた養子細胞免疫遺伝子治療の基礎的研究

利用药物诱导凋亡相关基因进行过继性细胞免疫基因治疗的基础研究

基本信息

批准号：
12217020
负责人：
中内啓光
金额：
$ 2.75万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217020/
关键词：
自殺遺伝子 HSV-TK Fas FKBP12 AP20187 免疫遺伝子治療アポトーシス

项目摘要

数多くの予備実験により、HSV-TKに変わる新規自殺遺伝子としてヒト由来Fas death domainを選択した。また、薬剤によるFas遺伝子発現調節に関しては、FKBPの変異分子であるFKbinding protein12(FKBP12)を利用した。FKBP12は免疫抑制剤のFK506には結合せず、新たに合成された低化合物AP20187の存在下でのみ二両体を形成する分子である。AP20187も同様に生体に存在するFKBPに結合することはなく、免疫抑制効果は示さない。これら分子と細胞膜固定のための低親和性神経成長因子受容体分子(LNGFR)とのキメラ蛋白質LFDを作成し(低親和性神経成長因子受容体分子:L、FKBP12:F、ヒトFasのdeath domain:D)、LFD発現レトロウイルスベクターを産生する細胞株PG13/GCsapLFD(MPSV)を樹立した。また、コントロールとしてLFDよりdeath domainを欠失したキメラ蛋白質(LFDD)も同時に作製し、そのウイルス産生細胞も樹立した(PG13/GCsapLFDD(MPSV))。これらウイルス産生細胞を用いて、ヒト末梢血リンパ球を含む種々の細胞に遺伝子を導入し、AP20187によるアポトーシス効果を検討した。遺伝子導入細胞はLFD、あるいはLFDD遺伝子導入後、LNGFR抗体を用いて分離された。その結果、LFDD発現HeLa、HT1080(human fibrosarcoma)では高濃度のAP20187(1mM)においても増殖を続けたが、LFDを発現したこれら細胞はわずか1nMのAP20187の存在下で死滅した。同様に、LFDを発現したヒト末梢血T細胞の半数以上は10nMのAP20187の存在下で12時間以内に死滅したが、LFDDを発現したヒト末梢血T細胞は過剰量のAP20187(10mM)の存在下においても増殖を続けた。

A number of new regulations have been introduced for the preparation of HSV-TK, which is the origin of Fas death domain. FKBP binding protein12(FKBP12) is used in the regulation of Fas gene expression. FKBP12 binds to the immunosuppressive agent FK506 and synthesizes to the low molecular weight compound AP20187. AP20187: The presence of FKBP in the same organism is a sign of immunosuppression. Cell line PG13/GCsapLFD(MPSV) was established to produce the low affinity receptor molecule for growth factor (LNGFR), the low affinity receptor molecule for growth factor (L, FKBP12:F, Fas death domain:D), and the low affinity receptor molecule for growth factor (LFD). LFD protein (LFDD) and PG13/GCsapLFDD(MPSV) are responsible for the production of cell DNA. The results of the introduction of the gene into the cells containing the gene were discussed in detail. After the LFD gene was introduced into the cells, the LNGFR antibody was isolated. As a result, LFDD was found in HeLa and HT1080 (human fibrosarcoma), but the proliferation was increased at high concentrations of AP20187 (1mM). LFD was found in HeLa and HT1080, but the cells were killed in the presence of AP20187 at 1nM. More than half of the peripheral blood T cells were killed within 12 hours in the presence of AP20187 (10 mM), and more than half of the peripheral blood T cells were killed in the presence of AP20187 (10mM).