薬剤誘導性アポトーシス関連遺伝子用いた養子細胞免疫遺伝子治療の基礎的研究

利用药物诱导凋亡相关基因进行过继性细胞免疫基因治疗的基础研究

• 批准号: 12217020
• 负责人: 中内 啓光
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217020/
• 关键词: 自殺遺伝子; HSV-TK; Fas; FKBP12; AP20187; 免疫遺伝子治療; アポトーシス

数多くの予備実験により、HSV-TKに変わる新規自殺遺伝子としてヒト由来Fas death domainを選択した。また、薬剤によるFas遺伝子発現調節に関しては、FKBPの変異分子であるFKbinding protein12(FKBP12)を利用した。FKBP12は免疫抑制剤のFK506には結合せず、新たに合成された低化合物AP20187の存在下でのみ二両体を形成する分子である。AP20187も同様に生体に存在するFKBPに結合することはなく、免疫抑制効果は示さない。これら分子と細胞膜固定のための低親和性神経成長因子受容体分子(LNGFR)とのキメラ蛋白質LFDを作成し(低親和性神経成長因子受容体分子:L、FKBP12:F、ヒトFasのdeath domain:D)、LFD発現レトロウイルスベクターを産生する細胞株PG13/GCsapLFD(MPSV)を樹立した。また、コントロールとしてLFDよりdeath domainを欠失したキメラ蛋白質(LFDD)も同時に作製し、そのウイルス産生細胞も樹立した(PG13/GCsapLFDD(MPSV))。これらウイルス産生細胞を用いて、ヒト末梢血リンパ球を含む種々の細胞に遺伝子を導入し、AP20187によるアポトーシス効果を検討した。遺伝子導入細胞はLFD、あるいはLFDD遺伝子導入後、LNGFR抗体を用いて分離された。その結果、LFDD発現HeLa、HT1080(human fibrosarcoma)では高濃度のAP20187(1mM)においても増殖を続けたが、LFDを発現したこれら細胞はわずか1nMのAP20187の存在下で死滅した。同様に、LFDを発現したヒト末梢血T細胞の半数以上は10nMのAP20187の存在下で12時間以内に死滅したが、LFDDを発現したヒト末梢血T細胞は過剰量のAP20187(10mM)の存在下においても増殖を続けた。

Many く の reserve be 験 に よ り, HSV TK に - わ る traces of new rules on suicide 伝 son と し て ヒ ト origin Fas death domain を sentaku し た. Youdaoplaceholder0, drug によるFas residue 伝 regulation に related <s:1> て, FKBP <s:1> variant molecule であるFKbinding protein12(FKBP12)を utilization of た. FKBP12 は immunosuppression tonic の FK506 に は combining せ ず, new た に synthetic さ れ た low compound AP20187 の presence で の を み struck two body formation す る molecular で あ る. AP20187 is similar to に organisms に that have するFKBPに binding する と と なく なく, and the immunosuppressive effect さな shows さな に. The <s:1> れら molecule と cell membrane imparts <s:1> ため the low-affinity receptor molecule of growth factor (LNGFR)と キメラ キメラ the キメラ protein LFDを is used to make <s:1> (low-affinity receptor molecule of growth factor :L, FKBP12:F, ヒトFas, death) Domain: D), LFD 発 now レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を produce す る cell lines PG13 / GCsapLFD (MPSV) を set し た. ま た, コ ン ト ロ ー ル と し て LFD よ り death domain を owe lost し た キ メ ラ protein (LFDD) も and make し, そ に の ウ イ ル ス cells も set し た (PG13 / GCsapLFDD (MPSV)). こ れ ら ウ イ ル ス produce cells を using い て, ヒ リ ト peripheral blood ン パ ball を む 々 species. の cells に heritage 伝 を import し, AP20187 に よ る ア ポ ト ー シ ス unseen fruit を beg し 検 た. The residual 伝 plasmid was introduced into the cells of <s:1> LFD and ある <s:1> <s:1> LFDD. After the residual 伝 plasmid was introduced, the LNGFR antibody を was isolated by <s:1> て and された. そ の results, LFDD 発 HeLa, HT1080 (human fibrosarcoma) で は high-concentration の AP20187 (1 mm) に お い て も raised colonization を 続 け た が, LFD を 発 now し た こ れ ら cells は わ ず か 1 nm の AP20187 の presence で die out し た. With others in に, LFD を 発 now し た ヒ ト more than half of the peripheral blood T cells の は 10 nm の AP20187 の presence で に within 12 time die out し た が, LFDD を 発 now し た ヒ ト peripheral blood t-cells は than turning volume の AP20187 (10 mm) presence of の に お い て も raised colonization を 続 け た.

项目成果

Nakauchi H, et al.: "Cell Therapy."Springer-Verlag Tokyo.. 240 (2000)

Nakauchi H 等人：“细胞疗法”。Springer-Verlag Tokyo.. 240 (2000)

Kaneko S, et al.: "Simplified Retroviral Vector GCsap with Murine Stem Cell Virus Long Terminal Repeat Allows High and Continued Expression of Enhanced Green Fluorescent Protein by Human Hematopoietic Progenitors Engrafted in Nonobese Diabetic/Severe Comb

Kaneko S 等人：“带有鼠干细胞病毒长末端重复序列的简化逆转录病毒载体 GCsap 允许植入非肥胖糖尿病/重度梳子中的人类造血祖细胞持续高表达增强型绿色荧光蛋白

Kaneta M, et al,: "A role for pref-1 and HES-1 in thymocyte development."J Immunol. 164巻. 256-264 (2000)

Kaneta M 等人：“pref-1 和 HES-1 在胸腺细胞发育中的作用。”《免疫学杂志》164. 256-264 (2000)

Shibuya,A., et al.: "Fca/m receptor mediates endocytosis of IgM-coated microbes."Nature Immunol.. 1巻. 441-446 (2000)

Shibuya, A., et al.：“Fca/m 受体介导 IgM 包被的微生物的内吞作用。”《自然免疫学》第 1. 441-446 卷（2000 年）

Hsu HC, et al.: "Hematopoietic stem cells express Tie-2 receptor in the murine fetal liver."Blood. 96巻. 3757-3762 (2000)

Hsu HC 等人：“造血干细胞在小鼠胎儿肝脏中表达 Tie-2 受体。”血液。 96. 3757-3762 (2000)