Integrated molecular basis for herpesvirus replication and pathogenesis

点击翻译按钮获取中文摘要

本申請課題では、研究代表者が長年の基礎研究で蓄積してきた様々な感染現象に関する知見を基盤に、先端的テクノロジーにより紐解く各感染現象を生体レベルのin depth解析に落とし込み、多階層的知見を単純ヘルペスウイルス(HSV)の増殖・病態発現機構の全体像として統合的に理解することを目標としている。今期は、以下の知見を解明した。1.イメージングとCRISPRスクリーニングを併用することで、HSV粒子の核膜通過を司る新規宿主因子として、Orphan transporter SLC35E1を同定した。SLC35E1が核膜間に出芽したウイルス粒子を包む小胞と核外膜間の融合段階に関与していたこと、SLC35E1のtransporter活性を司ると想定されるアミノ酸残基における変異導入(K142A)時、SLC35E1欠損と同様の表現系が認められたことから、核膜間領域への物質のやり取りが、効率的なHSV粒子の核膜通過に必要であることが示唆された。2.シングル・セルテクノロジーにより、HSV遺伝子発現の不均一性を生み出す宿主因子の有力な候補を得た。実際、候補宿主因子のKO細胞を樹立後、多段階のウイルス遺伝子発現をリアルタイムに可視化できる組換えHSVを用いて、HSV遺伝子発現を1細胞単位で詳細に解析することで、候補宿主因子がHSV遺伝子発現の不均一性を司ることを見出した。3. HSV主要エンベロープ蛋白質におけるN型糖鎖修飾が、中和抗体からの回避に関与することを解明した。今後は、ヒト・ガンマグロブリン投与マウスを用いて、本糖鎖修飾の生体レベルにおける役割の解明を試みる。また、変異HSVを用いたマウス病態解析モデルで得られた知見と想定される分子機構を突破口に、変異HSVとKOマウスを用いた病態解析を実施し、生体レベルにおけるHSV抵抗性因子とHSVによる回避機構を解明しつつある。