新たな抗ウイルス戦略をめざしたヘルペスウイルス感染最初期過程の解析

分析疱疹病毒感染的初始过程寻找新的抗病毒策略

• 批准号: 16017242
• 负责人: 川口 寧
• 金额: $ 5.76万
• 依托单位: The University of Tokyo (2005)Nagoya University (2004)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017242/
• 关键词: HSV; EBV; PK; BGLF4; UL13; EBNA-LP; 不死化; 感染最初期

本研究の目的は、HSV(HSV:herpes simplex virus)およびEBV(EBV:Epstein-Barr virus)感染直後に発現する制御因子およびウイルス特異プロテインキナーゼ(PK)の機能発現機構を解析し、新たな抗ウイルス剤開発や抗ウイルス戦略構築に向けての基礎的な知見を蓄積することにある。我々は本研究班において、EBVによるB細胞の不死化に大きな役割を果たしているEBNA-LPの機能が、EBV PKであるBGLF4によるSer-35のリン酸化によって制御されうることを明らかにしている。しかし、EBNA-LPは潜伏感染期に発現するのに対し、BGLF4は溶解感染期に発現することから、BGLF4が実際に感染細胞内でEBNA-LPを標的としているかは不明であった。本年度我々は、BGLF4がウイルス粒子中に存在し、生理学条件下においてカプシドよりリリースされることを明らかにした。また、BGLF4のカプシドからのリリースはリン酸化依存的であった。以上の結果は、EBVがB細胞に感染した際、BGLF4はウイルス粒子と共に細胞内に運び込まれた後、自己リン酸化依存的に細胞内にリリースされ、感染直後に発現するウイルス因子EBNA-LPのSer-35をリン酸化することを示唆している。HSVのPKであるUL13のノックアウトウイルスの解析から、UL13の機能の1つはICP0やUL41といった様々なウイルス因子の発現を制御していることが明らかにされている。しかし、UL13はウイルス特異PKとして機能するだけでなく、EBV BGLF4同様にウイルス粒子構成タンパク質としても機能している。よって、UL13ノックアウトウイルスで得られる知見が、UL13のPK活性の消失によるものか、PK以外の機能の欠失によるものかは不明であった。今年度我々は、UL13のinvariant lysine (Lys-176)に点変異を導入した組み換えHSV(YK403)を構築した。YK403は野生体と同様にUL13タンパク質を発現するが、PK活性を消失していた。興味深いことに、YK403感染細胞においては、UL13ノックアウトウイルス感染細胞で観察されるICP0やUL41といったウイルス因子の発現低下が観察されなかった。以上の結果は、UL13のPK活性は、ウイルス因子の発現制御には関与していないことを示している。つまり、UL13は、PK以外の未同定な機能を有し、その機能がウイルス因子の発現制御をしていることが明らかとなった。

The purpose of this study is, HSV(HSV:herpes simplex virus)およびEBV(EBV:Epstein-Barr Virus get) infection straight after に 発 now す る suppression factor お よ び ウ イ ル ス specific プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ (PK) の function 発 institutions now を parsing し, new た な resistance ウ イ ル ス tonic open 発 や resistance ウ イ ル ス 戦 slightly build に to け て の based な knowledge accumulation of を す る こ と に あ る. This seminar I 々 は に お い て, EBV に よ る の B cells die change に big き な "を cut fruit た し て い る EBNA - LP の function が, EBV PK で あ る BGLF4 に よ る Ser - 35 の リ ン acidification に よ っ て suppression さ れ う る こ と を Ming ら か に し て い る. し か し, EBNA - LP は latent infection period に 発 now す る の に し, seaborne BGLF4 は dissolved infection period に 発 now す る こ と か ら, BGLF4 が be interstate に within infected cells で EBNA - LP を mark と し て い る か は unknown で あ っ た. This year I 々 は, BGLF4 が ウ イ ル ス に し, physiological conditions in the particle に お い て カ プ シ ド よ り リ リ ー ス さ れ る こ と を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0, BGLF4 カプシド カプシド ら リリ リリ ス ス リリ リ <s:1> acidifying dependent であった. の above results は, EBV が B cells に infection し た interstate, BGLF4 は ウ イ ル ス particle と に に cell total shipped び 込 ま れ た after, their リ ン acidification dependent に intracellular に リ リ ー ス さ れ, infection straight after に 発 now す る ウ イ ル ス factor EBNA - LP の Ser - 35 を リ ン acidification す る こ と を in stopping し て い る. HSV の PK で あ る UL13 の ノ ッ ク ア ウ ト ウ イ ル ス の parsing か ら, UL13 の function の 1 つ は ICP0 や UL41 と い っ た others 々 な ウ イ ル ス factor の 発 now を suppression し て い る こ と が Ming ら か に さ れ て い る. し か し, UL13 は ウ イ ル ス specific PK と し て function す る だ け で な く, EBV BGLF4 with others に ウ イ ル ス particles タ ン パ ク qualitative と し て も function し て い る. よ っ て, UL13 ノ ッ ク ア ウ ト ウ イ ル ス で have ら れ る knowledge が, UL13 の の PK disappeared に よ る も の か, PK outside の functional の owe lost に よ る も の か は unknown で あ っ た. This year, I have 々 を, UL13 <s:1> invariant lysine (Lys-176)に point variation を, introduced it into the <s:1> た group み, replaced it with えHSV(YK403)を, and constructed it into た. YK403 は with others in the wild body と に UL13 タ ン パ ク qualitative を 発 now す る が disappear, PK activity を し て い た. Fun deep い こ と に, YK403 infected cells に お い て は, UL13 ノ ッ ク ア ウ ト ウ イ ル ス infected cells で 観 examine さ れ る ICP0 や UL41 と い っ た ウ イ ル ス factor の 発 now low が 観 examine さ れ な か っ た. The above <s:1> results <e:1>, UL13 <s:1> PK activity <e:1>, ウ <s:1> ス ス factor <e:1> occurrence control に <e:1> and <s:1> て な な とを とを とを とを とを show that <s:1> て る る る る る る are related. つ ま り, UL13 は, PK の failed with な function を し, そ の function が ウ イ ル ス factor の 発 now suppression を し て い る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

Herpes simplex virus type 1 UL51 protein is involved in maturation and egress of virus particles

• DOI: 10.1128/jvi.79.11.6947-6956.2005
• 发表时间: 2005-06-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Nozawa, N;Kawaguchi, Y;Nishiyama, Y
• 通讯作者: Nishiyama, Y

Construction of recombinant herpes simplex virus type 1 expressing green fluorescence protein without loss of any viral genes.

构建表达绿色荧光蛋白且不丢失任何病毒基因的重组单纯疱疹病毒 1 型。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Virol. 78
• 作者: Harazaki;M.;et al.;M.Kanamori et al.
• 通讯作者: M.Kanamori et al.

Development of a monoclonal antibody against Epstein-Barr virus nuclear antigen leader protein (EBNA-LP) that can detect EBNA-LP expressed in P3HR1 cells.

开发针对 Epstein-Barr 病毒核抗原前导蛋白 (EBNA-LP) 的单克隆抗体，可检测 P3HR1 细胞中表达的 EBNA-LP。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Microbiology and Immunology (in press)
• 作者: Fumio Shaku;Go Matsuda;Rie Furuya;Chinatsu Kamagata;Mie Igarashi;Michiko Tanaka;Mikiko Kanamori;Yukihiro Nishiyama;Naoki Yamamoto;Yasushi Kawaguchi
• 通讯作者: Yasushi Kawaguchi

The role of protein kinase activity expressed by the UL13 gene of herpes simplex virus 1 : The activity is not essential for optimal expression of ICP0 and UL41.

单纯疱疹病毒1的UL13基因表达的蛋白激酶活性的作用：该活性对于ICP0和UL41的最佳表达不是必需的。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Virology 341
• 作者: J. Arii;et. al.;A.Kato et al.;M.Tanaka et al.
• 通讯作者: M.Tanaka et al.

Identification of proteins phosphorylated directly by the Us3 protein kinase encoded by herpes simplex virus 1

• DOI: 10.1128/jvi.79.14.9325-9331.2005
• 发表时间: 2005-07-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Kato, A;Yamamoto, M;Kawaguchi, Y
• 通讯作者: Kawaguchi, Y