ジカウイルスアジア型株間の比較に基づくジカウイルスの病態発現機序の解明

基于亚洲寨卡病毒株比较阐明寨卡病毒病理表达机制

• 批准号: 19J21312
• 负责人: 稲垣 拓哉
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J21312/
• 关键词: ジカウイルス; リバースジェネティクス

本研究では、ジカウイルス（ZIKV）の流行前の株（東南アジア由来NIID123株）と流行後の株（アメリカ大陸由来PRVABC59株）の間で、両株の表現型の違いをもたらす遺伝的背景を同定し、それをもとにZIKVの感染機構や病態発現機序の解明することを目指した。本年度までに、NIID123株とPRVABC59株の遺伝子操作系を開発した。我々のグループでは以前にも、ZIKVゲノムcDNAの全長をクローニングすることで同系の開発を行っていた（Kato et al. 2017, 2018）。しかし、ウイルスの安定した作製が困難であったため、ゲノムcDNAを3分割してクローニングし直すことで、安定した遺伝子操作系の開発に成功した。本系を用いて、ZIKVのprMタンパク質が、ZIKVのマウスに対する病原性に寄与することを報告した（Nakayama et al. 2021）。また、NIID123株とPRVABC59株の間で、prMタンパク質の146番目（prM146）のアミノ酸の違いが、両株の表現型の違いをもたらすことを発見した（Inagaki et al. 2021）。本年度は、本課題の更なる発展に向け、これまでの視座であるPRVABC59株とNIID123株の比較とは異なる観点で研究を進めた。PRVABC59株に比べると、NIID123株のVero細胞での増殖能は低い。この増殖能の高低はprM146のアミノ酸の違い（PRVABC59株：Leu、NIIID123株：Phe）が決めており、両株の間でprM146のアミノ酸を交換すると、その増殖能が逆転する。また、ZIKVのprM146はLeuで保存されており、PheであるのはNIID123株のみであった（Inagaki et al. 2021）。そこで、NIID123株をVero細胞で繰り返し継代することで、prM146がPheからLeuへ置換するのかを検証した。継代したNIID123株のゲノム配列を、次世代シークエンサーで解析を行った。ほとんどのリードでprM146のコドンはPheのままであり、Leuへの置換があったのは2%強にとどまった。NIID123株はprM146がPheのまま、すなわち増殖能が低いまま安定している特殊な株であることが示唆された。

In this study, the background of pre-epidemic virus (ZIKV) strain (NIID123 strain), post-epidemic strain (PRVABC59 strain), epigenetic strain (PRVABC59 strain), epigenetic virus (ZIKV) infection mechanism were identified, and the pathomorphology of the infection mechanism was explained. This year, the operating system of PRVABC59 and NIID123 will be in operation. We are responsible for the promotion of the previous cDNA and the Kato et al of the same department (Kato et al). 2017, 2018). The operation of the system was successful, the operation of the sub-operation system was successful, and the operation of the cDNA system was successful. In this department, we send it to the Nakayama et al (Nakayama et al) by sending it to Nakayama et al. 2021). PRVABC59, NIID123, prM, prM146, Inagaki et al, Inagaki et al. 2021). This year, this year, we will further develop the research on the development of the PRVABC59 plant, the NIID123 plant, and the research site. The reproductive capacity of PRVABC59 was lower than that of Vero and NIID123. The ability of prM146 colonization was different from that of acid traps (PRVABC59 strain: Leu, NIIID123 strain: Phe). It was determined that the ability of colonization was reversed. ZIKV, ZIKV, prM146, Leu, Phe, Phe, NIID123, Inagaki et al. 2021). The Vero cells of NIID123 plant and prM146 plant were reproduced in the first place, and the Phe cells of each plant were reproduced. The next generation of NIID123 plants will be arranged and the next generation will be parsed. Please tell me that you need to pay attention to prM146. You will need to pay more attention to the Phe situation. The colonization ability of NIID123 plant prM146 and Phe plant was lower than that of diazepam plant and special plant.