ウシ脂肪交雑形成に関連する遺伝子発現変動の原因変異の同定

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黒毛和種去勢雄牛尾根部仙尾骨筋サンプルを採取し、PCR-RFLP法を用いたタイピング（遺伝子型判定）により、EDG1多型、TTN多型のそれぞれについて、3つの遺伝子型群のサンプル、高脂肪交雑形成と関連する対立遺伝子である高脂肪交雑アリル（EDG1多型ではTアリル、TTN多型ではTアリル）のホモ型群（高脂肪交雑アリルホモ型群）、低脂肪交雑アリル（EDG1多型ではGアリル、TTN多型ではCアリル）のホモ型群（低脂肪交雑アリルホモ型群）、両アリルのヘテロ型群を選抜していた。マイナーアリルのホモ型群のサンプルについては、昨年度、本年度において追加のタイピングを行い、サンプル数の増加を図った。さらに、mRNAレベルでの発現変動との関連の解析を行うために、選抜したサンプルからトータルRNAを抽出し、リアルタイムPCRによるEDG1とTTNのmRNAレベルの定量データとタイピングデータを用いて、EDG1多型のTアリル、TTN多型のTアリルが、それぞれEDG1のmRNAレベルでの発現増加、TTNのmRNAレベルでの発現減少と関連するという結果を得ていた。また、タンパク質レベルでの発現変動との関連の解析を行うために、選抜したサンプルからライセートを調製し、ウェスタンブロッティングによるEDG1とTTNのタンパク質レベルの定量データとタイピングデータを用いて、EDG1多型のTアリル、TTN多型のTアリルが、それぞれEDG1のタンパク質レベルでの発現増加、TTNのタンパク質レベルでの発現減少と関連するという予備的な結果を得ていた。本年度、追加サンプルの追加解析を行い、関連について確認した。また、転写活性および核タンパク質結合性の解析のための詳細なプロトコールを検討するとともに、トランスフェクション法およびライセート調整の予備検討を行った。