S.mutansとS.sobrinusの共感染による重症う蝕発生メカニズムの解明

阐明由于 S.mutans 和 S.sobrinus 共同感染导致严重龋齿发生的机制

基本信息

批准号：
19K10388
负责人：
藤原卓
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

研究計画として， in vitro 実験と臨床データを用いる研究を予定していたが，新型コロナウィルス感染症の広がりによって臨床研究が困難になったためin vitro研究を中心に行った．供試菌として，Streptococcus mutans MT8148株およびStreptococcus sobrinus 6715株を用いた．S. mutansとS. sobrinusの共培養実験を行うために，それぞれの株の抗生物質耐性変異株を作成した．それぞれの野生株をBrain Heart Brothで培養し，培養液を遠沈して分離し菌を濃縮した．Streptomycin (SM) 500 μｇ/ｍL含有のMitis-Salivarius（MS）寒天平板に播種し,37℃で2日間培養した．培養後に出現したコロニーを釣菌し，単離作業を行った後，親株と同じミュータンスレンサ球菌であることを，マンニトール，ソルビトール，ラフィノース，メリビオースの糖発酵能を調べて確認した．現在，同様の手法によって，カナマイシン，エリスロマイシンに対する耐性株作成を試みている．次いで，得られたストレプトマイシン耐性株を用いてS. mutansとS. sobrinusの共凝集および共培養実験を行った．SM体制S. mutansとSM感受性S. soburinusを菌量の相対比を変化させながら，混合し，凝集を観察した．その後，適時希釈を行ってSMを含まないMS-寒天およびSM-MS寒天に混合液を播種し，コロニー数を計測した．結果として，2菌種の混合による凝集および増殖コロニー数には，有意な差は見られなかった．今後，条件を変化させるとともに，培養上清などの添加実験を予定している．

该研究计划计划使用体外实验和临床数据，但是COVID-19的扩散使临床研究变得困难，因此我们专注于体外研究。链球菌突变菌株MT8148和Sobrinus菌株6715用作测试细菌。创建了每种菌株的抗生素耐药突变体，以执行S. mutans和S. sobrinus的共培养实验。将每个野生菌株均在脑心脏汤中培养，并将培养基离心至分开，并浓缩细菌。将混合物在含有500μg/mL链霉素（SM）的Mitis-Salivarius（MS）琼脂板上播种，并在37°C培养2天。在捕获了栽培后出现的菌落后，通过检查甘露醇，山梨糖醇，黎糖糖和meribiose的糖发酵能力得到证实，这是与母菌株相同的脉络链球菌。当前，我们正在尝试使用相同的方法创建对卡纳米霉素和红霉素具有抗性的菌株。接下来，使用所得抗霉素抗性菌株进行了突变链球菌和Sobrinus的共融合和共培养实验。在改变细菌载荷的相对比时，混合了SM状态链球菌和Sm敏感的S. soburinus，并观察到聚集。之后，将混合物在没有SM的情况下播种在MS-Agar和SM-MS琼脂上进行及时稀释，并测量了菌落数量。结果，在两种物种的混合引起的聚集和生长菌落数量中未发现显着差异。将来，我们计划改变条件并添加培养上清液和其他材料。