S.mutansの付着に関わるグルカン合成酵素系の遺伝子工学的解析

参与变形链球菌附着的葡聚糖合酶系统的基因工程分析

• 批准号: 06771584
• 负责人: 藤原 卓
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771584/
• 关键词: グルコシルトランスフェラーゼ; スクロース依存性付着; Streptococcus mutaus

トランスポゾンTn1545由来のカナマイシン耐性遺伝子(kmr)をGTase-IをコードするgtfB遺伝子がクローニングされたプラスミドpSK6の中間に挿入し,S.mutansMT8148株に形質転換してallelic replacementによる挿入変異株を作製した.その結果コロニー形態の異なる3種類の形質転換株が分離された.サザンブロットを行ってkmrの挿入部位を調べたところ,コロニー形態がスムース型とラフ型の中間型を示すB29株はgtfBにkmrが挿入し,一方,親株,と同様のラフ型のB58株はgtfCにkmrが挿入していた.また,スムース型で親株よりもやや小さめのコロニーであるB32株はgtfBの後半部とgtfCの前半部が欠落し,その間にkmr遺伝子が挿入していることが明らかになった.これら変異株のGTaseの発現をウエスタンブロットで解析するとサザンブロットの結果を反映して,gtfBに挿入が起きたB29では菌体上に存在する156kdのGTase-Iの発現が認められず,一方gtfCに挿入が起きたB58株では菌体上に存在する145kdのGTase-SIの発現が認められなかった.gtfBとgtfCの両者間に挿入が起こっていたB32株ではGTase-I,GTase-SIどちらの発現も見られなかった.いずれのタイプのGTase欠失株も親株に比較して,スクロース依存性の付着能は有意に低下していた.付着率の低下は2種類のGTaseが欠失しているB32株が最も著しく,GTase-SI欠失のB58株,GTase-I欠失のB29株の順であった.これらの付着率の低下には各菌株間で統計学的に有意の差が認められた.この結果はGTase-Iに比較して,グルカン合成能が低いとされているGTase-SIが,粘着性のグルカンが合成されるのに特に重要な役割を果たしていることを示唆している.

ト ラ ン ス ポ ゾ ン Tn1545 origin の カ ナ マ イ シ ン patience heritage 伝 child (KMR) を GTase -i を コ ー ド す る gtfB posthumous son 伝 が ク ロ ー ニ ン グ さ れ た プ ラ ス ミ ド pSK6 の middle に scions into し, S.m utansMT8148 strains に form quality planning in し て allelic Replacement に よ る scions into - different strains を cropping し た. そ の results コ ロ ニ の ー form different な る 3 kinds の form quality planning in separation plant が さ れ た. サ ザ ン ブ ロ ッ ト を line っ て KMR の scions into parts を adjustable べ た と こ ろ, コ ロ ニ ー form が ス ム ー ス type と ラ フ type の middle type を shown す b-29 strains は gtfB に KMR が scions Into し, one party, the parent strain, と with others の ラ フ type の B58 strains は gtfC に KMR が scions into し て い た. ま た, ス ム ー ス type で parent strain よ り も や や small さ め の コ ロ ニ ー で あ る B32 strains は gtfB の second half と gtfC の first が owe し, そ の between に KMR heritage 伝 son が scions into し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. こ れ ら - different strains の GTase の 発 now を ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト で parsing す る と サ ザ ン ブ ロ ッ ト を の results reflect し て, gtfB に scions into が up き た b-29 で は bacteria に exist on す る 156 kd の GTase -i の 発 が now recognize め ら れ ず, one party gtfC に scions into が up き た B58 strains で は に exist す on bacteria る 145 kd の GTase - SI の 発 が now recognize め ら れ な か っ た. GtfB と gtfC の struck between those に scions into が up こ っ て い た B32 strains で は GTase -i, GTase - SI ど ち ら の 発 も now see ら れ な か っ た. い ず れ の タ イ プ の GTase owe seedlings に も kiss loss compare し て, ス ク ロ ー ス dependent The sexual charge can に intentionally に lower the て て た た. Pay the rate low の は 2 kinds の GTase が owe lost し て い る B32 strains が も the most し く, GTase lost - SI owe の B58 strains, GTase - I owe lost の b-29 の strains suitable で あ っ た. こ れ ら の pay the rate low の に は among strains で statistical に intentionally の poor が recognize め ら れ た. こ の results は GTase -i に し て, グ ル カ ン synthesis can が low い と さ れ て い る GTase - SI が, tackiness の グ ル カ ン が synthetic さ れ る の に に important な "を cut fruit た し て い る こ と を in stopping し て い る.