S.mutansの付着に関わるグルカン合成酵素系の遺伝子工学的解析

参与变形链球菌附着的葡聚糖合酶系统的基因工程分析

• 批准号: 06771584
• 负责人: 藤原 卓
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771584/
• 关键词: グルコシルトランスフェラーゼ; スクロース依存性付着; Streptococcus mutaus

トランスポゾンTn1545由来のカナマイシン耐性遺伝子(kmr)をGTase-IをコードするgtfB遺伝子がクローニングされたプラスミドpSK6の中間に挿入し,S.mutansMT8148株に形質転換してallelic replacementによる挿入変異株を作製した.その結果コロニー形態の異なる3種類の形質転換株が分離された.サザンブロットを行ってkmrの挿入部位を調べたところ,コロニー形態がスムース型とラフ型の中間型を示すB29株はgtfBにkmrが挿入し,一方,親株,と同様のラフ型のB58株はgtfCにkmrが挿入していた.また,スムース型で親株よりもやや小さめのコロニーであるB32株はgtfBの後半部とgtfCの前半部が欠落し,その間にkmr遺伝子が挿入していることが明らかになった.これら変異株のGTaseの発現をウエスタンブロットで解析するとサザンブロットの結果を反映して,gtfBに挿入が起きたB29では菌体上に存在する156kdのGTase-Iの発現が認められず,一方gtfCに挿入が起きたB58株では菌体上に存在する145kdのGTase-SIの発現が認められなかった.gtfBとgtfCの両者間に挿入が起こっていたB32株ではGTase-I,GTase-SIどちらの発現も見られなかった.いずれのタイプのGTase欠失株も親株に比較して,スクロース依存性の付着能は有意に低下していた.付着率の低下は2種類のGTaseが欠失しているB32株が最も著しく,GTase-SI欠失のB58株,GTase-I欠失のB29株の順であった.これらの付着率の低下には各菌株間で統計学的に有意の差が認められた.この結果はGTase-Iに比較して,グルカン合成能が低いとされているGTase-SIが,粘着性のグルカンが合成されるのに特に重要な役割を果たしていることを示唆している.

The reason for this is the origin of the Tn1545, which is called the tolerance test (kmr), the GTase-I, the gtfB, the gtfB, the pSK6, the pSK6, the S.mutansMT8148, the S.mutansMT8148, the allelic replacement, the tolerance, the temperature, the temperature and the temperature. The results showed that the strains were isolated from each other. One side, the same type, the same kmr, the same type, the other side, the same type, the same as The first half of the gtfC in the second half of the B32 gtfB is missing, and the first half of the gtfC is missing. The results showed that the results showed that there was no significant difference between the two groups. The results showed that there was a positive reaction on the bacteria since the introduction of GTase, gtfB, 156kd, GTase-I, and so on, the results showed that there was no significant difference between the two groups. One side of the GTFC was introduced into the strain B58, and there were 145kd strains on the strain B58. There was an increase in the number of bacteria on the GTFC strain GTase-SI. The GTFB strain gtfC strain was transferred into the strain B32 strain. The GTase-I,GTase-SI strain was detected. The number of GTase deficient plants is much higher than that of other plants, and the dependence of each plant is lower than that of other plants. The payment rate was lower than that of GTase, B32, GTase-SI, GTase-I and B29, respectively. The payment rate is low. There is an intentional difference in the statistics of each strain. The results showed that the GTase-I synthesis was able to reduce the performance of the GTase-SI, and the adhesion of the synthesis was very important.