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S.mutansの付着に関わるグルカン合成酵素系の遺伝子工学的解析

参与变形链球菌附着的葡聚糖合酶系统的基因工程分析

基本信息

批准号：
06771584
负责人：
藤原卓
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

トランスポゾンTn1545由来のカナマイシン耐性遺伝子(kmr)をGTase-IをコードするgtfB遺伝子がクローニングされたプラスミドpSK6の中間に挿入し,S.mutansMT8148株に形質転換してallelic replacementによる挿入変異株を作製した.その結果コロニー形態の異なる3種類の形質転換株が分離された.サザンブロットを行ってkmrの挿入部位を調べたところ,コロニー形態がスムース型とラフ型の中間型を示すB29株はgtfBにkmrが挿入し,一方,親株,と同様のラフ型のB58株はgtfCにkmrが挿入していた.また,スムース型で親株よりもやや小さめのコロニーであるB32株はgtfBの後半部とgtfCの前半部が欠落し,その間にkmr遺伝子が挿入していることが明らかになった.これら変異株のGTaseの発現をウエスタンブロットで解析するとサザンブロットの結果を反映して,gtfBに挿入が起きたB29では菌体上に存在する156kdのGTase-Iの発現が認められず,一方gtfCに挿入が起きたB58株では菌体上に存在する145kdのGTase-SIの発現が認められなかった.gtfBとgtfCの両者間に挿入が起こっていたB32株ではGTase-I,GTase-SIどちらの発現も見られなかった.いずれのタイプのGTase欠失株も親株に比較して,スクロース依存性の付着能は有意に低下していた.付着率の低下は2種類のGTaseが欠失しているB32株が最も著しく,GTase-SI欠失のB58株,GTase-I欠失のB29株の順であった.これらの付着率の低下には各菌株間で統計学的に有意の差が認められた.この結果はGTase-Iに比較して,グルカン合成能が低いとされているGTase-SIが,粘着性のグルカンが合成されるのに特に重要な役割を果たしていることを示唆している.

Tn1545 is derived from a resistant gene (kmr) called GTase-I, which is a variant of strain S. mutans MT8148. The results showed that three kinds of morphologically different plants were isolated. B29 strain B58 strain B29 strain B58 strain B59 strain B59 strain B58 strain B58 strain B59 strain B58 strain B58 strain B5 The second half of gtfB and the first half of gtfC of B32 strain are incomplete, and the second half of gtfB and the first half of gtfC are incomplete. GTase-I was detected at 156kd in gtfB strain B29, and GTase-I was detected at 145kd in gtfC strain B58. GTase-I was detected at 156kd in gtfB strain B32. GTase-SI. The GTase in the middle of the tree is not enough to compare with the parent tree, and the dependency of the tree on the payment ability is intentionally low. B32 strain is the most important strain, GTase-SI strain is the most important strain, GTase-I strain is the most important strain, B58 strain is the most important strain, and B29 strain is the most important strain. The statistical differences between strains were significant. The results show that GTase-I is the most important factor in the synthesis of polymer, and GTase-SI is the most important factor.