P.gingivalis線毛遺伝子とリポ多糖の菌種内での多様性についての研究

牙龈卟啉菌菌毛基因和脂多糖种内多样性研究

• 批准号: 07772025
• 负责人: 藤原 卓
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772025/
• 关键词: Porphyromonas gingivalis; lipopolysaccharide; 線毛; fimA

Porphyromonas gingivalisは歯周病の主要な原因細菌である.この菌の菌体の表層には線毛とリポ多糖体(lipopolysaccharaide:LPS)が存在しており,菌周病の発病や病像の進行に深く関わっていると考えられる.そこで本研究では今まで別々に検討されてきた両者の性質をお互いの関連性という視点から検討した.使用菌株としてはP.gingivalis381,HG564株の2株と,381株とLPSの抗原性が等しいが,線毛の発現が見られない381FL株,また別の無線毛菌株として報告されているW50株を用いた.各P.gingivalis全菌体より温フェノール水法によってLPSを抽出し精製した.この精製LPSを申請者が以前作成した抗381株LPSモノクローナル抗体を用いてゲル内沈降反応を行った.その結果W50株由来のLPSは抗381株LPS抗体と沈降線を作らなかったが,他の3株由来のLPSは抗381株LPS抗体と融合する沈降線を作った.次いで上記の線毛非発現菌株より染色体DNAを抽出し,そのフィンブリリン遺伝子を,すでにクローニングされた菌株の線毛遺伝子(fimA)をもとにPolymerase chain reaction(PCR)を行ってfimA遺伝子を増幅しクローニングした.これらfimA遺伝子のDNA配列を決定し,既知のfimA遺伝子の配列と比較した.その結果,無線毛株W50株のfimA遺伝子はHG564株のものと酷似していたが,開始コドンと推定される部分に変異が存在し,そのために線毛が発現しないものと考えられた.またおなじ無線毛株の381FL株ではかなりの配列の異なりが見られ,明確なオープンリーディングフレームが認められなかった.これらの結果よりP.gingivalisの線毛とLPSにはかなりの多様性が存在していることが示唆された.

牙龈牙龈毒死是牙周疾病的主要原因。该细菌的细菌表面层含有纤毛和脂多糖（LPS），被认为与牙周疾病的发作和疾病进展深深涉及。因此，在这项研究中，从它们的关系的角度研究了两者的特性。所使用的菌株是两种菌株，牙龈疟原虫381和HG564，381菌株和LPS具有相同的抗原性，但没有PILUS表达，W50菌株已报道为另一种无线毛发细菌菌株。通过使用温暖的苯酚水法提取LPS并从所有牙龈细胞中纯化。该纯化的LPS使用申请人先前制备的抗381菌株LPS单克隆抗体进行凝胶沉淀反应。结果，来自W50应变的LPS没有与抗381应变LPS抗体产生沉淀线，但是其他三个菌株的LPS产生了与抗381菌株LPS LPS抗体融合的沉淀线。然后，从上述非表达菌株中提取染色体DNA，并根据已经克隆的菌株的纤毛基因（FIMA）使用Finbrillin基因用于聚合酶。 FIMA基因被扩增并通过链反应（PCR）克隆。确定这些FIMA基因的DNA序列，并与已知FIMA基因的序列进行比较。 W50无线头发菌株的FIMA基因与HG564菌株的FIMA基因非常相似，但是假定的起始密码子中有一个突变，被认为是启动密码子，因此纤毛没有表达。此外，在同一无线头发应变的381FL应变中存在很大的序列差异，并且没有观察到明确的开放阅读框架。这些结果表明，牙龈疟原虫的菌毛和LPS有相当多的多样性。