RNA干渉による抗コクサッキーウイルス作用の検討

RNA干扰检测抗柯萨奇病毒效果

• 批准号: 18659616
• 负责人: 藤原 卓
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659616/
• 关键词: コックサッキーウイルス; アンチセンス法; PNA; 小児歯科; RNAi; ペプチド核酸(PNA); アンチセンス効果

コックサッキーウイルスは、小児において「ヘルパンギーナ」や「手足口病」の原因となるウイルスで、咽頭痛、口蓋部と咽頭における小水庖・小潰瘍の形成といった口腔症状もあることから、小児歯科領域においても遭遇する可能性の高い疾患である。その治療法は、抗ウイルス剤の投与が一般的であるが、対症療法にすぎず、特効薬は存在しない。そこで我々はRNA干渉によるウイルス抑制を試みてきた。さらに今年度はアンチセンス法に基づいたペプチド核酸(PNA)によるウイルスの増殖抑制実験を行った。RNAiではなく、PNAを利用する利点としては、(i)PNA/DNA、PNA/RNA間の結合力は、DNA/DNA、DNA/RNA、RNA/RNA間の結合力よりも強い、(ii)PNAは天然に存在しない完全人工物質であるため、分解酵素などが存在しないということである。したがって、設計したアンチセンスPNAに抗ウイルス作用が観察されれば、RNAiよりも効果、投与法、保存法において優れた方法と考えられる。PNAの標的遺伝子は、(1)通常のRNAiで標的とされる領域、(2)VPg結合領域を選択し、これらの領域からセンス鎖、アンチセンス鎖の18塩基が抽出し、設計した。また、PNAの細胞内への取り込みは、cell penetrating peptideを修飾すると効率的であることが報告されており、この中でも最も効率が高いことが予想されるTat配列(GRKKRRQRRRPPQ-)を本研究では採用した。また、このペプチドとPNAの間には立体構造を維持するためにリンカー配列を2個付与した。上記の設計により作成されたアンチセンスPNAをコックサッキーウイルス感染細胞に投与し、プラークアッセーにより、抗ウイルス増殖作用を検討した。その結果、RNAi標的領域ではセンス鎖、アンチセンス鎖ともにほとんどウイルスの増殖が認められなかったが、VPg結合領域のアンチセンス鎖では若干のウイルス増殖抑制効果が認められた。今後は投与条件をさらに検討するとともに、RNAポリメラーゼのコード領域等も含め設計し、単独あるいは組み合わせによるウイルス増殖抑制効果も検討する予定である。

コ ッ ク サ ッ キ ー ウ イ ル ス は, small where に お い て "ヘ ル パ ン ギ ー ナ" や "hand, foot and mouth disease" の reason と な る ウ イ ル ス で headache, pharynx, flap と those に お け る num need, small ulcer の is と い っ た oral symptoms も あ る こ と か ら, small where 歯 branch field に お い て も encounter す likely の る い disorders で あ る. The treatment of そ <s:1>, the administration of antiウ <e:1> ス ス drugs, and the が general であるが, symptomatic treatment にすぎず, and specific drugs <e:1> all exist in <s:1> な な な. Youdaoplaceholder0 を で I 々 <s:1> RNA interference involved in によるウ ス ス ス ス inhibition を try みて た た た. さ ら に our は ア ン チ セ ン ス subgrade に づ い た ペ プ チ ド nucleic acid (PNA) に よ る ウ イ ル ス の raised colonization inhibit be 験 を line っ た. RNAi で は な く, PNA を using す る tartness と し て は, (I) PNA/DNA, PNA / の binding force は between RNA and DNA/RNA/DNA, DNA/RNA and RNA の binding force between よ り も い, (ii) PNA は natural に exist し な い completely artificial material で あ る た め, decomposition enzyme な ど が exist Youdaoplaceholder0 な と う う とである. し た が っ て, design し た ア ン チ セ ン ス PNA に resistance ウ イ ル ス role が 観 examine さ れ れ ば, RNAi よ り も unseen fruit, cast and method, preservation method に お い て optimal れ た method と exam え ら れ る. Traces of PNA の mark 伝 は, (1) usually の RNAi で mark と さ れ る areas, (2) the VPg を sentaku し, こ れ ら の field か ら セ ン ス lock, ア ン チ セ ン ス lock の 18 salt base が spare し, design し た. ま た, PNA の intracellular へ の take り 込 み は, cell penetrating peptide を modified す る と sharper rate で あ る こ と が report さ れ て お り, こ の in で も most も sharper rate high が い こ と が to think さ れ る Tat with column (GRKKRRQRRRPPQ -) を this study で は using し た. The に に three-dimensional structure を between また, <s:1> ペプチドと ペプチドとPNA <e:1> is maintained, and the するためにリ <s:1> カ <s:1> <s:1> また is arranged. Youdaoplaceholder6 two are given to た た. Written の design に よ り made さ れ た ア ン チ セ ン ス PNA を コ ッ ク サ ッ キ ー ウ イ ル ス infected cells に cast and し プ ラ ー ク ア ッ セ ー に よ り, resisting ウ イ ル ス raised colonization role を beg し 検 た. そ の results, RNAi target areas で は セ ン ス lock, ア ン チ セ ン ス lock と も に ほ と ん ど ウ イ ル ス の raised colonization が recognize め ら れ な か っ た が, VPg combined with field の ア ン チ セ ン ス lock で は several の ウ イ ル ス raised colonization inhibition of unseen fruit が recognize め ら れ た. Future は cast and conditions を さ ら に beg す 検 る と と も に, RNA ポ リ メ ラ ー ゼ の コ ー ド areas such as も め design し, 単 alone あ る い は group み close わ せ に よ る ウ イ ル ス raised colonization inhibition of unseen fruit も beg す 検 る designated で あ る.