神経筋接合部の機能改善を標的としたサルコペニア治療薬の探索

寻找以神经肌肉接头功能改善为目标的肌肉减少症治疗方法

• 批准号: 18K09026
• 负责人: 石井 久雄
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K09026/
• 关键词: サルコペニア; 神経筋接合部; 薬物療法; 創薬

先行研究にてAgrin-LRP4-MuSKシグナリングの促進効果を認めた40種類の1次候補薬を用いて、マウス筋芽細胞株C2C12の誘導筋管におけるアセチルコリンレセプター凝集試験を行い、促進作用を示した上位6剤を2次候補薬として2次スクリーニングを行った。C2C12細胞を培養し筋管を形成した後、neural agrinとともに2次候補薬を添加し、抗MuSK抗体を用いた免疫沈降後Western blottingを行い、抗リン酸化tyrosine抗体を用いてリン酸化MuSKの発現量を、投与後30分、1時間、3時間、6時間、24時間の5段階で定量評価し、MuSKのリン酸化効果を最も認めた最終候補薬剤1種(Drug A)を選定した。また同時に得られたWhole cell lysateを用いてWestern blotting法でDok7のリン酸化作用を評価した。Drug AはMuSKのリン酸化作用を有する一方でDok7のリン酸化においては抑制的に働くことが判明した。次いで名古屋大学神経遺伝情報学教室で作成したchrne(AChRεサブニユット)欠損マウスに対し、体重1gあたり200μgのDrug Aを0.5%メチルセルロースに溶解して出生後4週から28日間連続投与を行い、対照群(0.5%メチルセルロース投与群)と体重の推移、回転ホイールを用いて測定した1日運動量、生存日数を比較した。出生後AChRのγサブユニットがεサブユニットに置換されるためchrne欠損マウスは出生後8週～12週程度で死亡するが、薬剤の投与により運動機能の維持や生命予後の改善が期待されたものの、本試験では薬剤の有効性を認めなかった。最終年度に予定していた老齢マウス(24月齢C57BL/6マウス)での試験の準備のため、chrne欠損マウス試験と並行して、老齢モデルマウス作成のためのマウスの飼育を行った。

先行研究的载体Agrin-LRP4-MuSK促增殖活性果粒40肽1次重复使用载体，促增殖作用指示剂C2C12噬菌体诱导剂，促增殖作用指示剂6次重复使用载体2次重复使用载体。C2C12神经细胞酸性磷酸酶微管形成抑制剂、神经聚集蛋白2次原位杂交添加剂、抗MuSK抗体用酪氨酸免疫沉淀蛋白Western blotting酶联免疫吸附试验、抗酪氨酸化酪氨酸抗体用异硫氰酸酯酶化MuSK酶定量测定、抗与30分、1分、3分、6分、24分、5段酶定量测定、MuSK酶化能力结果最高可达1分（药物A）。全细胞裂解物用Western blotting法检测Dok7蛋白质裂解作用。Drug A MuSK抗过敏作用有明显的一方Dok7抗过敏作用的抗过敏药物判定明。次阳明大学神绍荣情绪药理学实验室研制的AChRε受体拮抗剂，体重1g，口服量200μg，0.5%的阿托伐他汀，溶出orm出生后4天28天，对照组（0.5%的阿托伐他汀，溶出量与组），体重减轻，回服阿托伐他汀，使用阿托伐他汀确定1天存活量，存活数比对照组多。出生时，AChR γ-肾上腺素能受体（AChR γ-肾上腺素能受体）被植入心脏装置，心脏病患者出生时8岁~12岁死亡，心脏病患者与心脏病患者的要求均能维持生命，给予心脏改善，期待心脏病患者康复，本研究旨在探讨心脏病患者是否有可能发生心脏病。最高年度授予定额养老金（24月C57BL/6），养老金发放标准。