Molekulargenetische und funktionelle Untersuchungen zu dem Nicht-Lee kodierten Effektor A (NleA) von Shiga Toxin-produzierenden E. coli und seinen Varianten

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Nicht-LEE kodierte Typ IM Effektoren sind innerhalb der Shiga Toxin-produzierenden Escherichia coli weit verbreitet. Der phagenkodierte Effektor NleA4795 von E. coli O84:H4 Stamm 4795/97 wird mit Hilfe des Typ III Sekretionssystems des „Locus of enterocyte effacement in eukaryontische Zellen transloziert und kann dort in der Nähe des Golgi-Apparates nachgewiesen werden. Im Rahmen des beantragten Projekts sollen der genetische Hintergrund, die Regulation der Genexpression und die intrazelluläre Funktion des Nicht-LEE kodierten Effektors NleA4795 und einiger seiner Varianten, untersucht werden. Im Einzelnen sollen Domänen von NleA4795 identifiziert werden, die für die Translokation, die subzelluläre Lokalisation und die Funktion des Proteins, bzw. die Interaktion mit intrazellulären Interaktionspartnern, verantwortlich sind. Hierzu werden Deletionsmutanten und GFP-Fusionen hergestellt, die dann für die Untersuchung in HeLa Zellen eingesetzt werden. Mit Hilfe von Antikörpern gegen dieses Protein kann die subzelluläre Lokalisation bestimmt werden. Weiterhin soll untersucht werden ob die in den Vorarbeiten nachgewiesenen Typ MI Effektoren phagenkodiert sind und unter welchen Bedingungen sie exprimiert werden. Die Lokalisation von nleA im Prophagen BP-4795 weist auf horizontale Verbreitung dieser Varianten hin. Phagentransduktion und Wirtsspektrum sollen im Rahmen des beantragten Projekts untersucht werden.