哺乳類におけるCRISPR-Cas様ウイルス防御機構の解析

哺乳动物类CRISPR-Cas病毒防御机制分析

• 批准号: 21K15457
• 负责人: 小出 りえ
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15457/
• 关键词: 内在性RNAウイルス; 抗ウイルス免疫; 哺乳類; PIWI-interacting RNA; CRISPR-Cas

1. PIWI-piRNA経路ノックアウトがBoDV感染に及ぼす影響RNA切断活性に重要とされるPIWIドメインの一部を欠損したMili conditional KO（Mili cKO）マウスのコロニーを樹立し、これらのマウスの海馬から作製した神経前駆細胞（NPC）を用いてsmall RNA-seqを行った。その結果、Mili cKOマウスと野生型マウスのNPCにおいて、リード数やシーケンス長、シーケンスバイアスの差は殆ど認められず、NPCにおけるpiRNAの発現も精巣と比較すると非常に低かった。そこでBoDV感染に対するPIWI-piRNA経路の影響をより正確に評価できるin vitro実験系として、精子幹細胞を用いた新たな実験系を検討した。現在、野生型およびMili KOマウス由来の精子幹細胞を用いてBoDVの感染実験を進めている。2. EBLN由来piRNAによる抗ウイルス機構の解析先行研究からEBLN由来piRNAがNPCにおいてBoDVのmRNAをサイレンシングする可能性を着想したが、small RNA-seq解析の結果、NPCにおけるEBLN由来piRNAの発現は確認できなかった。一方、精巣由来の小分子RNAは、piRNAの特徴である1Uバイアスを示し、piRNAクラスターの内部もしくは近傍に存在するEBLN3, 4, 5全てにマップされた。また、BoDV N遺伝子の配列をpiRNAクラスターにノックインしたBoDV-N KIマウスの精巣において、小分子RNAがpiRNAクラスター内のBoDV-N配列にマップされることを確認した。

1. PIWI - piRNA 経 road ノ ッ ク ア ウ ト が BoDV infection に and ぼ す influences the activity of RNA to cut off the important と に さ れ る PIWI ド メ イ ン の a を owe loss し た his conditional KO (the case CKO) マ ウ ス の コ ロ ニ ー を し, こ れ ら の マ ウ ス の hippocampal か ら cropping し た 駆 cells (NPC) before god 経 を with い て small RNA - seq を line っ た. そ の results, his cKO マ ウ ス と wild-type マ ウ ス の NPC に お い て, リ ー ド number や シ ー ケ ン ス length, シ ー ケ ン ス バ イ ア ス の poor は perilous ど recognize め ら れ ず, NPC に お け る piRNA の 発 も now fine 巣 と compare す る と very low に か っ た. そ こ で BoDV infection に す seaborne る PIWI - piRNA 経 road の influence を よ り に correct evaluation 価 で き る in vitro be 験 department と し て, sperm cells を い た new た な be 験 department を beg し 検 た. Now, wild-type およびMili KO ウス ウス originated from <s:1> sperm stem cells を infected with て てBoDV および into めて る る. 2. EBLN origin piRNA に よ る resistance ウ イ ル ス institution の analytical first research か ら EBLN origin piRNA が NPC に お い て BoDV の mRNA を サ イ レ ン シ ン グ す る possibility think を し た が, small The results of RNA-seq analysis and the occurrence of NPCにおけるEBLN from piRNA confirm で な な な った. Side and fine 巣 origin の small rnas は, piRNA の, 徴 で あ る 1 u バ イ ア ス を し, piRNA ク ラ ス タ ー の internal も し く は nearly exist alongside に す る EBLN3, 4, 5 full て に マ ッ プ さ れ た. ま た, BoDV N heritage 伝 の match sequence を piRNA ク ラ ス タ ー に ノ ッ ク イ ン し た BoDV -n KI マ ウ ス の fine 巣 に お い て, small rnas が piRNA ク ラ ス タ ー within の BoDV -n with column に マ ッ プ さ れ る こ と を confirm し た.

项目成果

The regulation of persistent Borna disease virus infection by RNA silencing factors in human cells

人体细胞中RNA沉默因子对博尔纳病病毒持续感染的调节

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2023.03.069
• 发表时间: 2023
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kaneko Yuka;Naito Yuui;Koide Rie;Parrish Nicholas F.;Takahashi Tomoko
• 通讯作者: Takahashi Tomoko