白血病とウイルス特異的不死化細胞傷害性T細胞の細胞バンク化に向けての基礎研究

白血病细胞库和病毒特异性永生化细胞毒性T细胞的基础研究

• 批准号: 15659229
• 负责人: 安川 正貴
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659229/
• 关键词: 白血病; ウイルス感染症; 免疫療法; 細胞傷害性T細胞; T細胞レセプター; 自殺遺伝子; WT1; 遺伝子治療

白血病と難治性ウイルス感染症に対する細胞免疫療法の開発目的で研究を遂行し、以下の成果を得た。1)白血病細胞に高発現し、正常細胞における発現量は極めて低値であるWT1およびhTERT特異的細胞傷害性T細胞(CTL)クローンを樹立した。これらのCTLクローンは白血病細胞や肺がん細胞などの固形癌細胞に対してHLAクラスI拘束性細胞傷害性を示した。CTLクローンをHerpesvirus saimiri感染によって不死化させた。不死化CTLクローンは抗原刺激なくして増殖を示し、本来の抗原特異性は保たれていた。さらに、thymidine kinase遺伝子を導入し、ガンシクロビル添加によって死滅することを確認した。2)腫瘍細胞に強い細胞傷害性を示すWT1特異的CD8陽性CTLクローンからT細胞レセプターα鎖およびβ鎖遺伝子をクローニングし、正常CD4陽性およびCD8陽性T細胞に遺伝子導入した。TCR遺伝子導入CD8陽性T細胞はWT1特異的細胞傷害活性を獲得し、白血病細胞に対してHLAクラスI拘束性に細胞傷害性を示した。同様に、TCR遺伝子導入CD4陽性T細胞もHLAクラスI拘束性にWT1特異的免疫応答を示し、Th1サイトカインを産生した。ただし、CD4陽性T細胞による機能発現には標的細胞上のHLAクラスIIとCD4分子との結合が必要であることも明らかとなった。3)HLA-DP5拘束性CD4陽性T細胞が認識する新たなWT1エピトープを同定した。このペプチド特異的CD4陽性T細胞はHLA-DP5拘束性かつWT1特異的に白血病細胞を傷害した。4)新たな免疫不全マウスにヒト造血幹細胞を移植することによってヒト免疫系を構築したマウスを作製した。今後、ヒトにおけるワクチン開発に有用であると思われる。以上の研究成果から、白血病ならびに難治性ウイルス感染症に対する効果的で安全な新たな細胞免疫療法の開発が可能であることが示された。

The research on the development of cellular immunotherapy for leukemia and refractory infections was carried out, and the following results were obtained. 1)Leukemia cells are highly expressed, while normal cells are highly expressed. WT1 and hTERT-specific cytotoxic T cells (CTL) are established. These CTL responses to leukemia cells, lung cells, and solid cancer cells are indicative of HLA binding cell toxicity. CTLs are infected with Herpesvirus saimiri and are not killed. The antigen-specific antigen In addition, thymidine kinase gene is introduced and confirmed. 2)T1-specific CD8-positive CTL gene expression in tumor cells is strongly correlated with cytotoxicity, and CD4-positive and CD8-positive T cell gene expression in tumor cells is strongly correlated with cytotoxicity. CD8-positive T cells transfected with TCR gene acquire WT1-specific cytotoxicity and demonstrate HLA I-binding cytotoxicity in leukemia cells. In the same way, TCR genes are introduced into CD4-positive T cells, HLA binding and WT1-specific immune responses are expressed, and Th1-specific immune responses are produced. CD4 positive T cells are required to bind HLA II and CD4 molecules to target cells. 3) HLA-DP5-binding CD4-positive T cells are recognized as new WT1 cells. These CD4-positive T cells are specific for HLA-DP5 binding and WT1-specific leukemia cells. 4)A new type of hematopoietic stem cell transplantation In the future, we will continue to work hard to develop new technologies. The above research results show that the development of new cell immunotherapy is possible for leukemia and refractory infections.

项目成果

Human cord blood- and bone marrow-derived CD34+ cells regenerate gastrointestinal epithelial cells

• DOI: 10.1096/fj.04-2396fje
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: FASEB JOURNAL
• 影响因子: 4.8
• 作者: Ishikawa, F;Yasukawa, M;Harada, M
• 通讯作者: Harada, M

Generation of human tumor-specific, HLA class I-restricted Th1 and Tc1 cells by cell engineering with tumor peptide-specific T cell receptor genes.

通过使用肿瘤肽特异性 T 细胞受体基因进行细胞工程，生成人类肿瘤特异性、HLA I 类限制性 Th1 和 Tc1 细胞。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Blood 106
• 作者: Tsuji T;Yasukawa M;Matsuzaki J;Ohkuri T;Chamoto K;Wakita D;Azuma T;Niiya H;Miyoshi H;Kuzushima K;Oka Y;Sugiyama H;Ikeda H;Nishimura T.
• 通讯作者: Nishimura T.

Yanai, F., Yasukawa, M., et al.: "Essential roles of perforin in antigen-specific cytotoxicity mediated by human CD4^+ T lymphocytes : analysis using the combination of hereditary perforin-deficient effector cells and fas-deficient target cells"J.Immunol.

Yanai, F., Yasukawa, M., et al.：“穿孔素在人 CD4^ T 淋巴细胞介导的抗原特异性细胞毒性中的重要作用：使用遗传性穿孔素缺陷效应细胞和 fas 缺陷靶细胞的组合进行分析”

Identification of novel MUNC13-4 mutations in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis and functional analysis of MUNC 13-4-deficient cytotoxic T lymphocytes.

家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症中新型 MUNC13-4 突变的鉴定以及 MUNC 13-4 缺陷型细胞毒性 T 淋巴细胞的功能分析。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Med.Genet. 41
• 作者: Yamamoto;K.;Ishii;E.;Sako;M.;Ohga;S.;Furuno;K.;Suzuki;N.;Ueda;I.;Imayoshi;M.;Yamamoto;S.;Morimoto;A.;Takada;H.;Hara;T.;Imashuku;S.;Sasazuki;T.;Yasukawa;M.
• 通讯作者: M.

Oka, Y., Yasukawa, M., et al.: "Wilms tumor gene peptide-based immunotherapy for patients with overt leukemia from myelodysplastic syndrome (MDS) or MDS with myelofibrosis"Int J Hematol.. 78. 56-61 (2003)

Oka，Y.，Yasukawa，M.，等人：“针对骨髓增生异常综合征 (MDS) 或伴有骨髓纤维化的 MDS 的明显白血病患者的基于肾母细胞瘤基因肽的免疫治疗”Int J Hematol.. 78. 56-61 (2003