Elucidation of cell-stromal interaction in biliary cancer using organoids and genomic analysis and development of target therapies

使用类器官和基因组分析阐明胆管癌中的细胞-基质相互作用以及靶向治疗的开发

• 批准号: 22K16548
• 负责人: 椎原 正尋
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16548/
• 关键词: 胆道癌; オルガノイド; ゲノム; 遺伝子解析; 個別化医療; 癌微小環境; 繊維芽細胞

本研究では患者由来胆道癌オルガノイドと癌関連繊維芽細胞(CAF)を用いて、双方のinteractionと、CAFの腫瘍増殖における役割を遺伝子解析から明らかにする。さらに、解析結果から導いた標的療法の効果をオルガノイド-CAFで検証することで、cancer stroma targeting therapyのin vitroモデル開発を目指す。既存の胆道癌オルガノイドに加えてサンプル数を増やすために新規培養を試みた。また癌腫による比較検討も考慮し、膵胆道腫瘍（膵癌、胆管癌、胆嚢癌、膵管内乳頭粘液性腫瘍、膵粘液性嚢胞腫瘍、膵充実性偽乳頭状腫瘍）に範囲を広げて培養を行った。術前画像で腫瘍径10mm以上の膵胆道腫瘍の対象症例70例のうち、転移などで手術不能となった症例を除いた計54例の膵胆道腫瘍のオルガノイド培養を試みた。同時にCAFと正常繊維芽細胞（NAF）の培養も行った。我々の既存のオルガノイド培養プロトコールに、酵素処理時間や、培養液に添加する成長因子の改変を加えて培養成功率や長期培養確立をさらに改善した。長期培養（3ヶ月以上）が可能だったオルガノイドは機能解析に回すために、原発腫瘍のexome sequenceを行い、ドライバー遺伝子変異を抽出し、オルガノイドでも特異的遺伝子変異の有無を確認した。またオルガノイドと原発腫瘍は標本の免疫染色を行い遺伝子発現の確認、比較を行った。また、長期培養が可能だったCAFとNAFは、標本を作製し特異的免疫染色を行い、上皮細胞が混在していないことを確認した。

This study で は origin in patients with biliary carcinoma オ ル ガ ノ イ ド と carcinoma masato even 繊 d bud cells (CAF) を い て, both sides の interaction と, CAF の is swollen sores raised colonization に お け る service cut を heritage 伝 son parsing か ら Ming ら か に す る. さ ら に, analytic results か ら guide い た target therapy の unseen fruit を オ ル ガ ノ イ ド - CAF で 検 card す る こ と で, cancer stroma targeting therapy の in vitro モ デ ル open 発 を refers す. The number of を increased やすために new rule culture を test みた of existing cervical biliary tract cancer ガノ ドに ドに. ま た cancer に よ る beg も し, compare 検 Cui biliary swollen sores (Cui cancer and bile duct cancer, bravery 嚢 papillary mucinous carcinoma, Cui tube swollen sores, Cui mucous 嚢 cell swollen sores, Cui be pseudo papillary swollen sores) filling に van 囲 を hiroo げ て line cultivate を っ た. Preoperative portrait で swollen sores diameter 10 mm の Cui biliary swollen sores の like disease patients, 70 cases of seaborne の う ち, planning な ど で surgery can't と な っ た cases を except い た 54 cases の Cui biliary swollen sores の オ ル ガ ノ イ ド cultivate を try み た. At the same time, にCAFと normal 繊 germ cells (NAF) are <s:1> cultured in に rows った. I 々 の existing の オ ル ガ ノ イ ド cultivate プ ロ ト コ ー ル に に や, broth, enzyme 処 time add す る growth factor の change - を plus え て cultivation や long-term success rate established を さ ら に improve し た. Culture for a long time (more than 3 ヶ month) が may だ っ た オ ル ガ ノ イ ド は function analytical に back す た め に, original 発 swollen sores の exome sequence を い, ド ラ イ バ ー heritage 伝 - different を drew し, オ ル ガ ノ イ ド で も specific heritage 伝 sub - have different の without を confirm し た. Youdaoplaceholder0, また, を, ガノ, ドと, ドと of the original abscesses, <s:1> immunostaining of the specimen を, 伝 of the present 伝, を confirmation and comparison を, った. ま た, long-term cultivation が may だ っ た CAF と NAF を は, specimen of し specific immune dyeing line を い, epithelial cells が mixed し て い な い こ と を confirm し た.

项目成果

Characteristic phenotypes of growth and mucus secretion of patient-derived organoids may substantiate invasive phenotypes of intraductal papillary mucinous neoplasms of the pancreas

患者来源的类器官的生长和粘液分泌的特征表型可能证实胰腺导管内乳头状粘液性肿瘤的侵袭性表型

• 发表时间: 2022
• 作者: Masahiro Shiihara;Tomohiko Ishikawa;Takuya Yoshida;Yuko Omori;Katsuya Hirose;Takanori Morikawa;Kei Nakagawa;Masamichi Mizuma;Hideo Ohtsuka;Fuyuhiko Motoi;Michiaki Unno;Yasunobu Okamura;Kengo Kinoshita;and Toru Furukawa
• 通讯作者: and Toru Furukawa

患者由来ＩＰＭＮオルガノイドとゲノム解析を用いた増殖形態の解明

使用患者来源的 IPMN 类器官和基因组分析阐明增殖形态

• 发表时间: 2022
• 作者: 椎原正尋;石川智彦;大森優子;元井冬彦;森川孝則;中川圭;林洋毅;水間正道;大塚英郎;岡村容伸;木下賢吾;海野倫明;古川徹
• 通讯作者: 古川徹

患者由来ＩＰＭＮオルガノイドの樹立とゲノム解析

患者来源的 IPMN 类器官的建立和基因组分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 椎原正尋;古川徹
• 通讯作者: 古川徹