Elucidation of cell-stromal interaction in biliary cancer using organoids and genomic analysis and development of target therapies

使用类器官和基因组分析阐明胆管癌中的细胞-基质相互作用以及靶向治疗的开发

基本信息

批准号：
22K16548
负责人：
椎原正尋
金额：
$ 3万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では患者由来胆道癌オルガノイドと癌関連繊維芽細胞(CAF)を用いて、双方のinteractionと、CAFの腫瘍増殖における役割を遺伝子解析から明らかにする。さらに、解析結果から導いた標的療法の効果をオルガノイド-CAFで検証することで、cancer stroma targeting therapyのin vitroモデル開発を目指す。既存の胆道癌オルガノイドに加えてサンプル数を増やすために新規培養を試みた。また癌腫による比較検討も考慮し、膵胆道腫瘍（膵癌、胆管癌、胆嚢癌、膵管内乳頭粘液性腫瘍、膵粘液性嚢胞腫瘍、膵充実性偽乳頭状腫瘍）に範囲を広げて培養を行った。術前画像で腫瘍径10mm以上の膵胆道腫瘍の対象症例70例のうち、転移などで手術不能となった症例を除いた計54例の膵胆道腫瘍のオルガノイド培養を試みた。同時にCAFと正常繊維芽細胞（NAF）の培養も行った。我々の既存のオルガノイド培養プロトコールに、酵素処理時間や、培養液に添加する成長因子の改変を加えて培養成功率や長期培養確立をさらに改善した。長期培養（3ヶ月以上）が可能だったオルガノイドは機能解析に回すために、原発腫瘍のexome sequenceを行い、ドライバー遺伝子変異を抽出し、オルガノイドでも特異的遺伝子変異の有無を確認した。またオルガノイドと原発腫瘍は標本の免疫染色を行い遺伝子発現の確認、比較を行った。また、長期培養が可能だったCAFとNAFは、標本を作製し特異的免疫染色を行い、上皮細胞が混在していないことを確認した。

在这项研究中，遗传分析将使用患者衍生的胆道癌器官和与癌症相关的成纤维细胞（CAF）揭示CAF在肿瘤生长中的相互作用和作用。此外，通过验证使用Organoid-CAF分析结果得出的靶向治疗的影响，我们旨在开发一种癌基质靶向治疗的体外模型。除了现有的胆道癌器官外，还尝试增加样品数量。此外，考虑了对癌瘤的比较研究，并进行了培养物，该区域扩大到胰腺胆汁肿瘤（胰腺癌，胆管癌，胆囊癌，胆囊癌，导管乳头状粘液肿瘤，胰腺粘液瘤，胰腺肿瘤tumor，pcancreatice psseodae tumorafirl）。在术前图像中肿瘤直径为10 mm或更多的胰腺胆道肿瘤的70例靶向病例中，我们试图培养54种胰腺胆道肿瘤的类器官，不包括由于转移和其他因素而无法使用的病例。同时，培养了CAF和正常成纤维细胞（NAF）。我们现有的器官培养方案用于通过修改酶处理时间和添加到培养基中的生长因子来提高培养成功率和长期培养物的建立。为了对能够长期培养的器官（超过3个月）提供功能分析，对原发性肿瘤进行了外显子体的测序，并提取了驱动基因突变，并且还确认了类器官，以查看是否有任何特定的基因突变。此外，对试样进行免疫染色以确认和比较器官和原发性肿瘤的基因表达。此外，对于能够长期培养的CAF和NAF，我们准备了标本并进行了特定的免疫染色，以确认没有混合上皮细胞。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Characteristic phenotypes of growth and mucus secretion of patient-derived organoids may substantiate invasive phenotypes of intraductal papillary mucinous neoplasms of the pancreas

患者来源的类器官的生长和粘液分泌的特征表型可能证实胰腺导管内乳头状粘液性肿瘤的侵袭性表型

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Masahiro Shiihara;Tomohiko Ishikawa;Takuya Yoshida;Yuko Omori;Katsuya Hirose;Takanori Morikawa;Kei Nakagawa;Masamichi Mizuma;Hideo Ohtsuka;Fuyuhiko Motoi;Michiaki Unno;Yasunobu Okamura;Kengo Kinoshita;and Toru Furukawa
通讯作者：
and Toru Furukawa

患者由来ＩＰＭＮオルガノイドの樹立とゲノム解析

患者来源的 IPMN 类器官的建立和基因组分析