ジーンターゲティング法を用いたアルデヒト脱水素酵素(aldh)2次損マウスの作成

利用基因打靶方法创建乙醛脱氢酶（ALDH）二次丢失小鼠

基本信息

批准号：
10770158
负责人：
北川恭子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

1 ALDH2ノックアウトマウスの作成F2マウスから戻し交配を行った結果N7まで進み、戻し交配はほぼ完了した。今後はマウスの諸実験に用いると共に、Aldh2 homo mutantマウスを凍結受精卵として保存する。2 in vitro系でのALDH2の解析(F2およびF3マウス肝粗画分での検討)(1)ミトコンドリア分画のアセトアルデヒドに対する酵素活性は、Aldh2 homo wildマウス由来の場合と比較してheterozygoteでは約1/2に低下、homo mutantでは完全消失していた。(2)抗ALDH2抗体を作成し、粗画分をwestern blot法で解析した。抗体はALDH2+/+、+/-mice由来ミトコンドリア分画を認識し、そのタンパクはリコンビナントmALDH2と等しいサイズを示した。(1),(2)の結果から、mALDH2欠失を目的としたAldh2 targetingの成功は、タンパクレベルでも証明された。(3)各種基質に対する酵素活性を測定、比較した。ミトコンドリア分画の活性レベルはALDH2の基質となる複数のアルデヒド体に対してAldh2 gene dosage effectが認められたが、細胞質分画の活性にはAldh1,3の選択的気質に対してgenotypeの影響は認められなかった。よってALDH2欠失時もAldh1,3の代償は発生していないと推測された。3 メトキシエタノール(ME)の連続経口投与(5日間)による精巣毒性F3マウスでは300mg/kgBW/day以上で精巣重量の有意な低下を示し、組織像としては精母細胞に障害が観察された。2-(3)でhomo mutantマウス由来肝粗分画のみMEの代謝産物に対して酵素活性を持たなかったことから、現在ALDH2欠損が上記精巣障害に及ぼす影響を検討中である。

1创建ALDH2淘汰小鼠回合是从F2小鼠中进行的，而后交叉几乎完成了。将来，ALDH2 HOMO突变小鼠将用于各种小鼠的实验，AldH2 HOMO突变小鼠将存储为冷冻受精卵。 2分析ALDH2体外的分析（对F2和F3小鼠的粗肝级分的检查）（1）与Aldh2 Homo野生小鼠相比，在杂合子中，线粒体分数与乙醛的酶活性在杂合子中降低了约1/2。（2）制备抗AldH2抗体，并通过Western印迹法分析粗馏分。抗体识别来自Aldh2+/+，+/-小鼠的线粒体级分，其蛋白质表现出等于重组MALDH2的大小。结果（1）和（2）表明，在蛋白质水平上也证明了ALDH2靶向MALDH2缺失的成功。（3）测量并比较针对各种底物的酶活性。观察到线粒体级分的活性水平对作为ALDH2底物的多种醛具有ALDH2基因剂量效应，但是对AldH1和3的选择性气质没有观察到对aldh1和3的基因型效应。因此，据推测，即使删除了ALDH2，ALDH1也没有补偿。 3在睾丸毒性F3小鼠中，甲氧基乙醇（ME）（5天）持续进行口服，显示出300 mg/kg bw/day或更多的睾丸体重显着降低，组织学图像显示出对精子细胞的损害。由于在2-（3）中，只有HOMO突变小鼠的粗肝分数没有针对我代谢产物的酶活性，因此目前正在研究AldH2缺乏对睾丸疾病的影响。