癌関連細胞周期調節遺伝子のソマティックノックアウト細胞の作成とその解析

癌症相关细胞周期调控基因的体细胞敲除细胞的创建和分析

• 批准号: 13216101
• 负责人: 北川 恭子
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216101/
• 关键词: 癌; ジーンターゲッティング; p27^<Kip1>; 予後

細胞周期調節機構であるRB経路の構成因子の一つであるp27^<Kip1>は、予後不良の癌において分解が亢進しているのが確認されているが、その因果関係は未だ不明である。本研究ではRB経路の崩壊による細胞悪性化のメカニズムの解明を目標とする。本研究におけるヒト遺伝子の細胞レベルでの機能解析はノックアウトマウスや臨床検体を材料とするのでは困難であると考られたため、「ヒト細胞を用いたヒト遺伝子のコンディショナルソマティクノックアウト細胞」を作成して解析材料とすることにした。まずp27^<Kip>欠失細胞を得るためのターゲッティングベクターを構築した。ベクター中には相同組み換え体を効率よく選択するためにpositive/negative selectionが可能となる遺伝子を、またコンデショナルなノックアウトのために標的領域両端にloxP遺伝子を導入した。現在p27^<Kip1>の分解が亢進していない大腸癌細胞HT116にターゲッティングベクターを導入し、相同組み換え体をスクリーニングしている。またp27^<Kip1>存在量の低下モデルとして、p27^<Kip1>の分解実行因子であるSkp2の恒常発現HCT116細胞を樹立した。マイクロアレイによってSkp2高発現によって発現変動する遺伝子の同定を試みたところ、9種の候補遺伝子が同定された。今後はそれらの発現変動の有無をin vitroおよびin vivoレベルで再検証のうえ、臨床の癌検体における発現変動を調べるとともに、癌形質の変化への関与を分子レベルで検討する。また上記の組み換え体が得られ次第、これも対象にして同様に解析を進める。一連の研究成果からは新しい分子標的をターゲットとした癌の悪性度の診断法、予後不良の癌の治療法の開発、並びに癌の悪性化の予防薬の開発への発展が期待される。

Cell cycle regulatory mechanisms are the components of the RB pathway, and the <Kip1>causal relationship between them is unclear. The aim of this study is to elucidate the cellular characteristics of RB pathways. In this study, the functional analysis of the cell cycle of the gene was carried out to analyze the clinical model material and the difficulty of preparing the analytical material. P27-P27-<Kip>P2 In the object, positive/negative selection is possible to efficiently select objects of the same group, and loxP vectors are introduced into the target areas of Kondeshirunale. The p27 protein <Kip1>is now hyperactive in colorectal cancer cells HT116. HCT <Kip1><Kip1>116 cells were established with a decrease in the presence of p27 and a breakdown factor of p27. 9 candidate genes are identified in the same way. In the future, the presence or absence of existing findings will be re-examined in vitro and in vivo, findings in clinical cancer models will be adjusted, and the relationship between changes in cancer morphology and molecular changes will be discussed. In addition to the above, the system can be divided into two parts: the first part and the second part. A series of research results are expected to develop new molecular targets for the diagnosis of cancer, the development of treatment methods for future adverse cancers, and the development of prevention methods for cancer.

项目成果

Kitagawa, K. et al.: "CYP2A6^*6, a novel polymorphism in Cytochrome P450 2A6, has a single amino acid substitution (R128Q) that inactivates enzymatic activity"Journal of Biological Chemistry. 276. 17830-17835 (2001)

Kitakawa, K. 等人：“CYP2A6^*6 是细胞色素 P450 2A6 中的一种新型多态性，具有单个氨基酸取代 (R128Q)，可导致酶活性失活”《生物化学杂志》。

Yang, M. et al.: "Individual differences in urinary cotinine levels in Japanese smokers : relation to genetic polymorphism of drug-metabolizing enzymes"Cancer Epidemiology Biomarkers prevention. 10. 589-593 (2001)

Yang, M. 等人：“日本吸烟者尿可替宁水平的个体差异：与药物代谢酶的遗传多态性的关系”癌症流行病学生物标志物预防。