PKCによるグリオーマ細胞の遊走亢進機構の解明-Src kinaseに着目して-

目的:本研究では、PKCによるグリオーマ細胞の遊走能亢進のメカニズムをSrcに注目して明らかにし、PKCとの関連を検討した.方法:細胞は、A172グリオーマ細胞を使用した.細胞に12-myristatel3-acetate(PMA)を作用させprotein kinase C(PKC)を活性化させる.この状態にて、細胞の遊走能および細胞の形態変化を、wound healing assay、免疫染色にて検討した.また、Src,Cas,Crk,Rac1の発現、リン酸化、細胞内局在、複合体の形成を、ウエスタンブロット法、または、免疫染色にて検討した.さらに、Src抑制剤であるPP2またはsiRNAを作用させることで、PKCによるグリオーマ細胞での上記の現象の変化を検討した.結果:PMAにより活性化されたPKCはCasのリン酸化とCas/Crkの複合体形成を誘導し、さらにRaclの活性化を誘導した.これらの現象は、PP2または、Src siRNAにより抑制され、SrcがPMAによるCas/Crk/Rac1経路の活性化に関与していることが示唆された.また、免疫組織化学的にPMAによりCas,Crk,Rac1がlamellipodiaに移動し、リン酸化されたCasの発現が細胞周辺で認められた.これらの結果は、Cas,Crk,Rac1がPMAによる細胞骨格の再構成に関与していることを示唆する.さらに、PMAはCrkのリン酸化を促進し、この現象はPP2またはSrc siRNAにより抑制された.これらの結果は、SrcがCrkのリン酸化を介して、Rac1の細胞内局在に関与していることを示す.以上の結果より、PMAによるglioblastomaの遊走は、PKC/Src/Cas/Crk/Rac1 signaling pathwayを介した細胞骨格の再構成により調節されている事が示された.

目的:本研究では、PKCによるグリオーマ細胞の遊走能亢進のメカニズムをSrcに注目して明らかにし、PKCとの関連を検討した.方法:細胞は、A172グリオーマ細胞を使用した.細胞に12-myristatel3-acetate(PMA)を作用させprotein kinase C(PKC)を活性化させる.この状態にて、細胞の遊走能および細胞の形態変化を、wound healing assay、免疫染色にて検討した.また、Src,Cas,Crk,Rac1の発現、リン酸化、細胞内局在、複合体の形成を、ウエスタンブロット法、または、免疫染色にて検討した.さらに、Src抑制剤であるPP2またはsiRNAを作用させることで、PKCによるグリオーマ細胞での上記の現象の変化を検討した.結果:PMAにより活性化されたPKCはCasのリン酸化とCas/Crkの複合体形成を誘導し、さらにRaclの活性化を誘導した.これらの現象は、PP2または、Src siRNAにより抑制され、SrcがPMAによるCas/Crk/Rac1経路の活性化に関与していることが示唆された.また、免疫組織化学的にPMAによりCas,Crk,Rac1がlamellipodiaに移動し、リン酸化されたCasの発現が細胞周辺で認められた.これらの結果は、Cas,Crk,Rac1がPMAによる細胞骨格の再構成に関与していることを示唆する.さらに、PMAはCrkのリン酸化を促進し、この現象はPP2またはSrc siRNAにより抑制された.これらの結果は、SrcがCrkのリン酸化を介して、Rac1の細胞内局在に関与していることを示す.以上の結果より、PMAによるglioblastomaの遊走は、PKC/Src/Cas/Crk/Rac1 signaling pathwayを介した細胞骨格の再構成により調節されている事が示された.