RLGS法によるがんDNA変化のスクリーニングとがん抑制遺伝子単離システムの開発

使用RLGS方法筛查癌症DNA变化并开发抑癌基因分离系统

• 批准号: 07272243
• 负责人: 林崎 良英
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272243/
• 关键词: RLGS; LOH; メチル化; 発癌モデルマウス; マウスゲノムマップ; 癌抑制遺伝子

癌組織におけるDNA変化領域をRLGS解析により同定することを目的として研究を進めた。癌発症モデルマウス(MTD2B6xSpetus)に生じた肝臓癌組織からDNAを抽出し、これをRLGS解析のサンプルとした。RLGS解析は以前にBSSバッククロスを用いてマウスゲノムマップを作成した時と同じ制限酵素セット(HotI-PvuII-PstI)を使用した。この癌組織DNAのRLGSパターン及び正常組織DNAのRLGSパターンを作成し、この中の、B6特異的あるいはSpretus特異的スポットについてそのスポット強度の変化を解析した。亜種特異的スポットを解析対象とした理由は1)スポット強度の変化が容易に判断できるため正常組織の混入を許容できる、2)どちらのアレルに変化が生じたかを区別できる、3)BSSバッククロスを用いて作成したゲノムマップを利用することで染色体上における位置を知ることができる、という点からである。この結果、一枚のRLGSゲルによる解析で、癌組織におけるDNA変化領域を染色体上の位置情報として同定することができた。このことはモデル動物における癌組織DNAの変化を全ゲノムレベルで解析する方法として非常に有用であると考えられる。次に、30種の癌組織DNAにおいて同様の解析を行うことによって、癌組織において高頻度に欠失の生じる変化領域を1、4、5、7、13番染色体に検出し、またこの他にも高頻度にメチル化される座位をいくつか検出した。さらに共通変化領域上に位置するRLGSスポットをクローニングし、これをプローブとしてサザン法によって癌組織DNAにおける変化を解析した結果、RLGS解析によって予想されたDNAの変化と同じ挙動を検出することができた。このプローブは、今後DNA変化領域内における存在が予想される癌遺伝子及び癌抑制遺伝子をクローニングするのに有用であると考えられる。このRLGS解析を進めるに当たって我々は16枚一体型の二次元電気泳動用泳動槽を考案し、実際に作成し運用することに成功している。

Cancer tissue analysis and identification Cancer development: MTD2B6xSpetus RLGS analysis is used to determine whether or not the BSS is active. The RLGS of cancer tissue DNA and the RLGS of normal tissue DNA were prepared, analyzed, and analyzed. The reasons for the analysis of species-specific samples are as follows: 1) The intensity of samples is easy to judge, 2) The normal tissue is allowed to mix, 3) The BSS is used to make samples, and the position of samples on chromosomes is known. The results of this analysis are as follows: 1. DNA transformation in cancer tissues This is a very useful method for analyzing the DNA transformation of cancer tissues in animals. In addition, 30 kinds of cancer tissue DNA were analyzed in the same way. In the cancer tissue, the high frequency of DNA loss was detected in chromosome 1, 4, 5, 7 and 13. In addition, the high frequency of DNA loss was detected in chromosome loci. RLGS analysis of DNA in common domain This is the first time in the history of DNA transformation that cancer genes and cancer suppressor genes have been used. The RLGS analysis was carried out successfully with 16 integrated two-dimensional electrokinetic swimming grooves.

项目成果

Okazaki Y.: "Direct detection and isolation of RLGS spot DNA marker tightly linkedto a specific trait using RLGS spot-bombing method" Prco. Natl. Acad. Sci. USA.92. 5610-5614 (1995)

Okazaki Y.：“使用 RLGS 点轰炸方法直接检测和分离与特定性状紧密相关的 RLGS 点 DNA 标记”Prco。

大隅智也: "実験医学別冊「遺伝子光学ハンドブック」RLGS法" (株)羊土社(印刷中), (1996)

大隅智也：“实验医学特别版“基因光学手册”RLGS方法”Yodosha Co., Ltd.（正在出版），（1996年）

Ohsumi T.: "Loss of hetrozy gosity in chromosome 1,5,7 and 13 in mouse hepatoma detected by systematic genome-wide scanning using RLGS genetic map" Biochem. Biophys. Res. Comm.212. 632-639 (1995)

Ohsumi T.：“使用 RLGS 遗传图谱进行系统全基因组扫描检测到小鼠肝癌中 1、5、7 和 13 号染色体杂合性缺失”Biochem。

Okazaki Y.: "Assignment of the hamater cardiomyopathy gene on chromosome 9 qa2.1-bl using RLGS whole genome mapping" Nature Genetics. (in press). 253-260 (1995)

Okazaki Y.：“使用 RLGS 全基因组作图对 9 号染色体 qa2.1-bl 上的锤状心肌病基因进行分配”《自然遗传学》。

Kuromitsu J.: "Programmed alterations of DNA methylation at CpG ialands during blastformation of peripheral blood lymphocytes" DNA Res.2. 263-267 (1995)

Kuromitsu J.：“外周血淋巴细胞胚芽形成过程中 CpG 区域 DNA 甲基化的程序性改变”DNA Res.2。