ラット小腸粘膜および培養細胞中のGlutathioneS-transferaseの研究

大鼠小肠粘膜及培养细胞中谷胱甘肽S-转移酶的研究

• 批准号: 08770402
• 负责人: 佐藤 隆
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770402/
• 关键词: GlutathioneS-transferase(GST); 小腸粘膜; 発癌物質; 免疫組織化学

ラットを使用し、発癌物質を経口投与した場合の小腸でのGlutathioneS-transferase(GST)の変化を経時的に免疫組織化学的に検討した。さらに小腸粘膜内のGSTの酵素活性を測定した。発癌物質はDiethylnitrosamine(DEN)を含む水を自由飲水させ、3日、1・4・8週目に、全小腸を摘出した。口側の上部小腸と肛側の下部小腸をそれぞれ一部ホルマリン固定し、残りを各々scrapingして粘膜部分を分離、ホモジネートを作製後遠心してサイトゾールを得た。GST活性は1-chloro-2,4-dinitrobenzeneを基質として分光学的方法で測定した。上部小腸では3日、1・4週でコントロール群と比べGST活性に変化が見られなかったが。8週で著明な上昇が見られた。しかし、下部小腸では経過中GST活性に変化は見られなかった。そこで各々のホルマリン固定標本を用いて、GST各アイソザイムの分布を免疫組織化学的に検討した。正常コントロールでは上部小腸でGST-Ya,Ypが陽性、下部小腸でGST-Yaが陰性、GST-Ypのみ陽性を示した。同様にDEN投与8週ではGSTアイソザイムの分布および染色強度に変化は見られず、上部小腸のcryptの細胞核のGST-Yp染色強度の増加傾向をわずかにみとめた。以上より、発癌物質DENに対する生体の防御反応の一つとして、上部小腸のGST、特にGST-Ypが重要な役割を成している。

使用大鼠，随着时间的流逝，对小肠中谷胱甘肽S-转移酶（GST）的变化进行了口服治疗时的免疫组织化学检查。此外，测量了小肠粘膜中GST的酶活性。致癌物是含有二乙基硝基胺（DEN）的水，在第1、4和8周的第3天，第三天去除了总小肠。口腔侧的小肠和肛门的下部小肠部分固定在福尔马林中，其余的则刮擦以分离粘膜部分，并制备匀浆并离心以获得细胞质。使用1-氯-2,4-二硝基苯作为底物，通过光谱确定GST活性。尽管与对照组相比，第3天的1和4周，小肠上部的GST活性没有变化。在八周内，有显着增长。但是，在下部小肠过程中，GST活性未观察到任何变化。因此，每个福尔马林固定的试样用于研究每种同工酶在GST免疫组织化学中的分布。在正常对照组中，GST-YA和YP在小肠上部为阳性，小肠下部的GST-YA为阴性，而GST-imp仅为阳性。同样，在给药8周时，GST同工酶的分布和染色强度也没有观察到变化，并且观察到上小肠隐窝的核的GST型染色强度略有增加。基于上述，小肠中的GST，尤其是GST-ESP，作为生物体对致癌物的保护性反应之一，起着重要作用。