Epiregulinによるヒト表皮ケラチノサイトの増殖・分化調節機構の研究

上皮调节蛋白调控人表皮角质形成细胞增殖分化机制的研究

• 批准号: 08770659
• 负责人: 白方 裕司
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770659/
• 关键词: 角化細胞; Epiregulin; EGF

目的:epiregulinは1995年新たに発見されたEGFファミリーに属する細胞成長因子であり、各種上皮性cell lineにおいて生理活性が明らかとなっているが表皮角化細胞に与える影響は明らかとなっていない。そこでepiregulinの表皮角化細胞に与える影響について検討した。材料と方法:正常ヒト皮膚より角化細胞を分離し、無血清培養法にて培養し、epiregulinを各種濃度で添加、4日後に細胞数を血球計算板を用いて計測した。またコンフルエントになった時点でepiregulinを各種濃度で添加、24時間培養後BrdUを2時間取り込ませ、取り込まれたBrdUを測定することでDNA合成能を検討した。また、EGFを各種濃度で添加しepiregulin mRNAの発現をNorthern Blot,RT-PCRにて検討した。さらにepiregulinに対する抗体を作製し、正常皮膚におけるepiregulinの発現を免疫組織化学的に検討した。結果:epiregulin 0.01-10ng/mlの濃度添加における増殖促進能は1ng/mlをピークとして約3倍の増殖促進効果を示した。BrdUの取り込みは10ng/mlをピークとして最大2倍のDNA合成促進を示した。epiregulin mRNAの発現は正常状態ではRT-PCR法を用いて40サイクルでdetectdできる程度の極微量しか発現していなかった。Northern Blot法を用いたmRNAの発現誘導についてはEGF 10ng/mlの刺激で1-6時間後に発現増強を示した。正常ヒト皮膚におけるepiregulinの発現はABC法ではdetectできなかった。考察:epiregulinは他のEGFファミリーと同様にヒト表皮角化細胞に対して増殖促進的に作用することが明らかとなった。mRNAの発現は正常状態ではほとんど発現しておらずEGF等の刺激により発現が誘導されると思われた。正常ヒト皮膚でepiregulinがdetectされない理由としてはmRNAが正常状態ではほとんど発現されていないことによると考えられた。

Objective: in 1995, epiregulin reported that EGF enzyme belongs to the growth factor of cell growth factor, and that the physiological activity of all kinds of epithelial cell line protein showed that keratosis of epidermis and keratosis of epidermis were detected. "epiregulin" epidermis keratinized "cell" and "shadow". Materials and methods: normal skin keratinization cell isolation, serum-free culture, addition of various levels of epiregulin, and cell count and blood cell count board were used after 4 days. Make sure that all kinds of epiregulin are added at different times. After 24 hours of training, the temperature of BrdU is selected at 2 hours, and the BrdU is used to determine the temperature of DNA synthesis. For different levels of Northern Blot,RT-PCR and EGF, add epiregulin mRNA to make sure that there is a lot of money in the system. Immunocytochemistry was detected by epiregulin antibody test and normal skin test by epiregulin assay. Results: the results showed that the addition of epiregulin 0.01-10ng/ml concentration could promote the colonization of 1ng/ml plants by about 3 times. BrdU is used to improve DNA synthesis by a maximum of 2 times the number of DNA synthesis promoters. Epiregulin mRNA shows that the normal state of the RT-PCR method shows that there is no significant difference in the degree of detectd infection with the method of 40%. The Northern Blot method showed that after stimulation of 1-6 hours with mRNA stimulation, the signal intensity was enhanced. Normal skin test