培養ヒト角化細胞における補体制御因子の発現におよぼすサイトカインの影響

细胞因子对培养人角质形成细胞补体调节因子表达的影响

• 批准号: 06770648
• 负责人: 白方 裕司
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770648/
• 关键词: 角化細胞; 補体制御因子; サイトカイン

<はじめに>細胞膜表面上には補体制御因子があり、自己補体の異常な活性化による細胞障害を防いでいる。ヒト表皮細胞膜上にもDAF,HRF20,MCPなどの補体制御因子の存在が確認されているが、培養ヒト角化細胞(ケラチノサイト)における補体制御因子の発現とサイトカイン刺激後の発現の変化について検討した。<材料と方法>1)HFK cell(Morinaga,Japan),NHEK cell(Kurabou,Japan)を無血清培地にて培養後、細胞を回収し、2×10^5 cells/50μlに調整、マウスモノクローナル抗DAF抗体(lA10),抗HRF20抗体(1F5),抗MCP抗体(M75、M177)と0℃30分反応させた。1%BSAを含む0.01M PBS pH7.4(PBS/BSA)にて3回洗浄後、抗マウスlgG(H+L)FITC conjugateと0℃30分反応させ、PBS/BSAにて3回洗浄後、1%ホルマリン加PBS/BSAにて細胞を固定しフローサイトメーターにて蛍光強度を測定した。2)上記細胞にlFNγ;500U/ml,TNFα;100ng/ml,lL1α;100u/ml,lL1β;100u/ml,lL3;1400u/m,lL6;40u/ml,lL10;100u/mlの濃度で添加後24時間培養し、1の方法と同様に蛍光強度を測定した。<結果>1)培養ヒト角化細胞の補体制御因子の発現;HRF20,MCPは90%以上の細胞で発現されていたが、DAFは5-10%の細胞において発現されていた。2)サイトカインによる補体制御因子発現;DAFではコントロールに対し有意な変化を認めなかった。HRF20ではlFNγ添加にて約30%の発現増強がみられたが、その他のサイトカインでは影響を受けず、MCPについては今回用いたサイトカインでは影響を受けないことが明らかとなった。<考按>今回の検討では培養ヒト角化細胞においても補体制御因子の発現が認められ、HRF20,MCPは90%以上の細胞において発現されていた。DAFは、5-10%の細胞においてのみ発現されていた。これは正常表皮では顆粒層に主に発現されていることより分化に伴い発現が増強するためと推察される。サイトカイン刺激後の変化はlFNγによりHRF20の発現増強がみられたが他のサイトカインでは変化はみられなかった。角化細胞における補体制御因子は比較的安定であり、自己補体による細胞傷害を制御していると推察されるが、他の制御機構が働いている可能性も否定できず、今後の検討課題とおもわれる。

<> On the surface of the cell membrane, the complement system is activated abnormally, and the cell barrier is prevented. The existence of DAF, HRF20,MCP and other regulatory factors on epidermal cell membrane was confirmed. The development of regulatory factors and the transformation of regulatory factors after stimulation in cultured keratinocytes were investigated. <Materials and Methods>1)HFK cells (Morinaga,Japan),NHEK cells (Kurabou,Japan) were cultured in serum-free medium, and the cells were recovered, 2×10^5 cells/50μl were adjusted, and the anti-DAF antibody (lA10), anti-HRF 20 antibody (1F5), anti-MCP antibody (M75, M177) were adjusted at 0℃ for 30 minutes. 1% BSA or 0.01M PBS pH 7.4 (PBS/BSA) after 3 backwashes, anti-inflammatory lgG(H+L)FITC conjugate at 0℃ for 30 minutes, PBS/BSA after 3 backwashes, 1% BSA plus PBS/BSA for fixation of cells and determination of light intensity. 2)The cells were cultured for 24 hours after addition of IFN γ;500U/ml,TNFα;100 ng/ml, IL 1α;100 u/ml, IL 1β;100u/ml, IL 3;1400u/m, IL 6;40u/ml, IL 10;100u/ml. <Results>1) The expression of regulatory factors in cultured keratinocytes; HRF20,MCP and DAF were more than 90% and 5-10% respectively. 2) The system control factor appears;DAF is the system control factor. HRF20 is about 30% stronger than FN γ, and it is affected by MCP. <ref> In this study, more than 90% of cultured keratinized cells were found to be involved in the production of regulatory factors, HRF20 and MCP. DAF, 5-10% of the cells in the middle of the medium and the development of the medium. The normal epidermis is mainly composed of granular layers, and the differentiation is mainly composed of granular layers. HRF-20 is the most powerful stimulus in the world. Corneration cell complement system control factors are relatively stable, complement system control factors are relatively stable.