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サルES細胞から内耳有毛細胞の効率的なin vitro分化誘導法の開発

猴ES细胞内耳毛细胞高效体外分化诱导方法的开发

基本信息

批准号：
21659393
负责人：
吉川正英
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では難聴に対する細胞移植治療を目指し、まずは多分化能を有する胚性幹細胞(ES細胞)より内耳有毛細胞へのin vitro分化誘導法の開発を目的とした。よりヒトに近い種の細胞を用いることで分化プロセスの解明を行う目的で、カニクイザルES細胞(cES)を用いたが、この場合、フィーダー細胞を必要とし、それらの細胞が分化誘導に対する何らかの影響を及ぼす可能性があるため、本年度はフィーダーフリーのカニクイザルES細胞(ff-cES細胞)を樹立し、さらに昨年度得られた知見を元に、内耳有毛細胞へのin vitro分化誘導を行った。ff-cES細胞は、ヒトES細胞用培地およびコーティング剤(リプロセル社)を用いることで馴化培養し、樹立した。この年ff-cES細胞は、内在性ALP活性の維持および、Oct-3/4、Nanog等の未分化関連遺伝子マーカーの発現が維持され、さらにSCIDマウスの皮下に移植することで、テラトーマの形成も認められたことから、多分化能を有するフィーダーフリーのcES細胞が樹立できたことが確認された。そこで、昨年度得られたデータを元に、ff-cES細胞を4日間胚様体形成させ、さらにストローマ細胞由来の培養上清を用いることで、内耳有毛細胞への分化誘導を試みた。最終的には、分化誘導約1カ月後に内耳有毛細胞マーカー(Math 1, Brn3.1, Myosin Vlla)の遺伝子発現および免疫染色によるタンパク質発現を認め、有毛細胞様細胞が分化誘導し得る条件を得ることができた。今後、さらにストローマ細胞から得られる液性因子のスクリーニングを行うことで、カニクイザルES細胞から内耳有毛細胞への分化プロセスを解明する予定である。

The purpose of this study is to use an in vitro differentiation induction method to induce embryonic stem cells (ES cells) with multidifferentiation capabilities and to induce hairy cells in the inner ear.よりヒトにNearly kind of cellsをUsing いることでdifferentiationプロセスの明を行うpurposeで、カニクイザルES Cells (cES) are used in cases where they are used, and when cells are necessary, they are necessary to induce differentiation of cES cells.対するWhat is the impact and possibility of があるため、This year's はフィーダーフリーのカニクイザルES The cells (ff-cES cells) are established, and the inner ear has hair cells. In vitro differentiation induction is carried out. The ff-cES cells and the ES cells were cultured and established using the Pedigree Biotechnology Co., Ltd.この年ff-cES cellsは、Maintenance of intrinsic ALP activityおよび、Oct-3/4、Nanog and other undifferentiated related genes 伝子マーカーの発appearsがmaintenanceされ、さらにSCIDマウスのsubcutaneous transplantation することで, テラトーマの forming もcognition められたことから, many The differentiation ability of cES cells has been established and confirmed.そこで, られたデータを元に, ff-cES cells were obtained last year and embryonic bodies were formed in 4 days, させ, さらThe culture supernatant of the にストローマcell origin was tested using the いることで and the inner ear hairy cells were differentiated and induced. The final hair cells appear in the inner ear approximately one month after induction of differentiation. Math 1, Brn3.1, Myosin Vlla) of the left 伝子発appears and the immunostaining によるタンパク発appears をidentificationめ, and the differentiation of hairy cells and cells is induced and the conditions are obtained ることができた. From now on, the さらにストローマcellからgets the られる Liquid Factorのスクリーニングを行うことで, カニクイザルES cells から inner ear hair cells への differentiation プロセスを clarification する predetermined である.