アシアロ糖タンパク質レセプターを用いたプラスミドDNAの肝細胞選択的送達法の確立

脱唾液酸糖蛋白受体选择性递送质粒DNA至肝细胞方法的建立

• 批准号: 08772091
• 负责人: 西川 元也
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772091/
• 关键词: 遺伝子治療; アシアロ糖タンパク質レセプター; プラスミドDNA; 肝臓; デリバリーシステム; ターゲティング

先天性遺伝子欠損をはじめとする各種難治性疾患の治療に対する遺伝子レベルでの治療法として、治療上必要なタンパク質をコードしたプラスミドDNAを直接生体に投与する治療法が大きな注目を集めている。しかし、プラスミドDNAは生体内での安定性が非常に低いため、医薬品としての利用に際してはDDSの適用が必要不可欠であると考えられる。中でも、薬物を標的部位に効率よく送達することを目指すターゲティング型DDS製剤を開発することにより、プラスミドDNAを目的とする細胞内へ送達して初めてこうした遺伝情報を薬物として利用する道が開かれるものと考えられる。本研究では、プラスミドDNAの肝細胞選択的送達法の確立を目的として、chloramphenicol acetyltransferase(CAT)をコードしたプラスミドDNA(pCAT)を用い、poly-L-lysine(PLL)にガラクトース修飾を施すことにより開発した肝細胞ターゲティング型キャリアー(GaL-PLL)との複合体を調製しその体内動態特性について検討した。平均粒子径約180nmかつ全体として弱負電荷を有するように設計したpCAT/Gal-PLL複合体は、静脈内投与後速やかに肝実質細胞に取り込まれることが明らかとなった。この時の遺伝子発現を免疫組織染色法により評価したところ肝臓内にCATの発現が認められたことから、本複合体投与によりin vivoでの肝細胞選択的遺伝子送達が達成できることが明らかとなった。また、安定な複合体の形成、肝癌細胞に対する遺伝子発現ならびに肝実質細胞への送達効率には用いるGal-PLLの分子量やガラクトース修飾率などの要因が重要であることも明らかとなった。以上のように、本研究の成果はプラスミドDNAの医薬品としての実用化に必要不可欠の情報を提供するものと思われる。

The treatment of congenital genetic defects is essential for the treatment of various refractory diseases. The stability of DNA in vivo is very low, and the application of DDS in medicine is necessary. The target site of the cell is the target site. The target site is the target site. This study aims to establish a method for the delivery of DNA to hepatocytes. In addition, the use of chloramphenicol acetyltransferase(CAT) and poly-L-lysine(PLL) in the modification of DNA to hepatocytes is investigated. The average particle diameter is about 180nm. The pCAT/Gal-PLL complex is designed to be injected intravenously and rapidly into liver cells. The expression of CAT in liver cells was evaluated by immunohistochemical staining. The expression of CAT in liver cells was evaluated by immunohistochemical staining. The expression of CAT in liver cells was evaluated by immunohistochemistry. The molecular weight and modification ratio of Gal-PLL are important for the formation of stable complexes, the development of gene in liver cancer cells, and the delivery efficiency of liver cancer cells. Therefore, the results of this study provide the necessary information for the development of DNA medicine and its application.

项目成果

M.Hashida: "Targeted delivery of drugs and proteins to the liver via receptor-mediated endocytosis" J.Controlled Release. (in press). (1997)

M.Hashida：“通过受体介导的内吞作用将药物和蛋白质靶向递送至肝脏”J.Controlled Release。

H.Hirabayashi: "Development and pharmacokinetics of galactosylated poly-L-glutamic acid as a biodegradable carrier for liver-specific delivery" Pharm.Res.13(6). 880-884 (1996)

H.Hirabayashi：“半乳糖基化聚-L-谷氨酸作为肝脏特异性递送的可生物降解载体的开发和药代动力学”Pharm.Res.13(6)。

M.Hashida: "Pharmacokinetics and targeted delivery of proteins and genes" J.Controlled Release. 41(1,2). 91-97 (1996)

M.Hashida：“蛋白质和基因的药代动力学和靶向递送”J.Controlled Release。

R.I.Mahato: "Physicochemical and disposition characterstics of antisense oligonucleotides complexed with glycosylated poly(L-Lysine)" Biochem.Pharmacol. (in press). (1996)

R.I.Mahato：“与糖基化聚（L-赖氨酸）复合的反义寡核苷酸的物理化学和处置特征”Biochem.Pharmacol。

Y.Takakura: "Control of pharmacokinetic profiels of drug-macromolecule conjugates" Adv.Drug Delivery Rev.19(3). 377-399 (1996)

Y.Takakura：“药物-大分子缀合物的药代动力学曲线的控制”Adv.Drug Delivery Rev.19(3)。