アシアロ糖タンパク質レセプターを用いたプラスミドDNAの肝細胞選択的送達法の確立

脱唾液酸糖蛋白受体选择性递送质粒DNA至肝细胞方法的建立

• 批准号: 08772091
• 负责人: 西川 元也
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772091/
• 关键词: 遺伝子治療; アシアロ糖タンパク質レセプター; プラスミドDNA; 肝臓; デリバリーシステム; ターゲティング

先天性遺伝子欠損をはじめとする各種難治性疾患の治療に対する遺伝子レベルでの治療法として、治療上必要なタンパク質をコードしたプラスミドDNAを直接生体に投与する治療法が大きな注目を集めている。しかし、プラスミドDNAは生体内での安定性が非常に低いため、医薬品としての利用に際してはDDSの適用が必要不可欠であると考えられる。中でも、薬物を標的部位に効率よく送達することを目指すターゲティング型DDS製剤を開発することにより、プラスミドDNAを目的とする細胞内へ送達して初めてこうした遺伝情報を薬物として利用する道が開かれるものと考えられる。本研究では、プラスミドDNAの肝細胞選択的送達法の確立を目的として、chloramphenicol acetyltransferase(CAT)をコードしたプラスミドDNA(pCAT)を用い、poly-L-lysine(PLL)にガラクトース修飾を施すことにより開発した肝細胞ターゲティング型キャリアー(GaL-PLL)との複合体を調製しその体内動態特性について検討した。平均粒子径約180nmかつ全体として弱負電荷を有するように設計したpCAT/Gal-PLL複合体は、静脈内投与後速やかに肝実質細胞に取り込まれることが明らかとなった。この時の遺伝子発現を免疫組織染色法により評価したところ肝臓内にCATの発現が認められたことから、本複合体投与によりin vivoでの肝細胞選択的遺伝子送達が達成できることが明らかとなった。また、安定な複合体の形成、肝癌細胞に対する遺伝子発現ならびに肝実質細胞への送達効率には用いるGal-PLLの分子量やガラクトース修飾率などの要因が重要であることも明らかとなった。以上のように、本研究の成果はプラスミドDNAの医薬品としての実用化に必要不可欠の情報を提供するものと思われる。

Congenital legacy 伝 son owe loss を は じ め と す る various intractable diseases treatment の に す seaborne る posthumous son 伝 レ ベ ル で の therapy と し て, treatment on necessary な タ ン パ ク qualitative を コ ー ド し た プ ラ ス ミ ド を DNA direct raw body に cast and す る therapy が big き な attention を set め て い る. し か し, プ ラ ス ミ ド は raw DNA in vivo で の stability が very low に い た め, medical 薬 と し て の using に interstate し て は DDS が の apply necessary not owe で あ る と exam え ら れ る. In で も, 薬 に を mark parts working rate よ く served す る こ と を refers す タ ー ゲ テ ィ ン グ type system of DDS tonic を 発 す る こ と に よ り, プ ラ ス ミ ド DNA を purpose と す へ served し る cell early て め て こ う し た heritage 伝 intelligence を 薬 content と し て using す る way が open か れ る も の と exam え ら れ る. In this study, で で and プラス プラス ド ドDNA samples were delivered to liver cells using 択 to establish を objectives と and て chloramphenicol Acetyltransferase (CAT) を コ ー ド し た プ ラ ス ミ ド DNA (pCAT) を い, poly real - L - lysine (PLL) に ガ ラ ク ト ー ス modified を shi す こ と に よ り open 発 し た hepatocellular タ ー ゲ テ ィ ン グ type キ ャ リ ア ー (GaL - PLL) と の complex を modulation し そ The dynamic characteristics within the body are に, に, て検 and て検. Average particle diameter of about 180 nm か つ all と し て weak negative charge を す る よ う に design し た pCAT/Gal - PLL complex は, speed after intravenous cast with や か に liver be stromal cells take り に 込 ま れ る こ と が Ming ら か と な っ た. When こ の の heritage 伝 son 発 now を immunohistochemical staining に よ り review 価 し た と こ ろ within a routine liver に CAT の 発 が now recognize め ら れ た こ と か ら, cast with the complex に よ り in vivo で の hepatocellular sentaku heritage 伝 child served が reached で き る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た, stable な complex の formation, liver cell に す seaborne る posthumous son 伝 発 now な ら び に liver be stromal cells へ の served sharper rate に は with い る Gal - PLL の molecular weight や ガ ラ ク ト ー ス modification rate な ど の by が important で あ る こ と も Ming ら か と な っ た. Above の よ う に, this study の は プ ラ ス ミ ド DNA の medical 薬 product と し て の be used に necessary not owe の criminal intelligence を provide す る も の と think わ れ る.

项目成果

M.Hashida: "Targeted delivery of drugs and proteins to the liver via receptor-mediated endocytosis" J.Controlled Release. (in press). (1997)

M.Hashida：“通过受体介导的内吞作用将药物和蛋白质靶向递送至肝脏”J.Controlled Release。

H.Hirabayashi: "Development and pharmacokinetics of galactosylated poly-L-glutamic acid as a biodegradable carrier for liver-specific delivery" Pharm.Res.13(6). 880-884 (1996)

H.Hirabayashi：“半乳糖基化聚-L-谷氨酸作为肝脏特异性递送的可生物降解载体的开发和药代动力学”Pharm.Res.13(6)。

M.Hashida: "Pharmacokinetics and targeted delivery of proteins and genes" J.Controlled Release. 41(1,2). 91-97 (1996)

M.Hashida：“蛋白质和基因的药代动力学和靶向递送”J.Controlled Release。

R.I.Mahato: "Physicochemical and disposition characterstics of antisense oligonucleotides complexed with glycosylated poly(L-Lysine)" Biochem.Pharmacol. (in press). (1996)

R.I.Mahato：“与糖基化聚（L-赖氨酸）复合的反义寡核苷酸的物理化学和处置特征”Biochem.Pharmacol。

Y.Takakura: "Control of pharmacokinetic profiels of drug-macromolecule conjugates" Adv.Drug Delivery Rev.19(3). 377-399 (1996)

Y.Takakura：“药物-大分子缀合物的药代动力学曲线的控制”Adv.Drug Delivery Rev.19(3)。