動態制御機能を賦与したキメラタンパク質発現ベクターによる新規遺伝子治療戦略

点击翻译按钮获取中文摘要

In vivo遺伝子導入による治療効果は産生タンパク質によって担われる。従って、導入タンパク質の細胞内・体内動態を制御することでin vivo遺伝子治療の効果増強が期待される。昨年度は、細胞透過ペプチド(CPP)をコードする配列をレポーター遺伝子発現プラスミドDNA (pDNA)に挿入し、タンパク質の遺伝子非導入細胞へのデリバリーを試みた。即ち、CPPとしてHSV VP22を選択し、VP22融合β-ガラクトシダーゼ発現pDNAを構築した。マウスでの検討から、融合タンパク質発現pDNAを用いることで、より広範な細胞でβ-ガラクトシダーゼが検出され、キメラタンパク質発現pDNAの有用性が示された。本年度は、抗原ペプチドをコードするpDNAに対して同様のアプローチを施すことでDNAワクチン効果の増大を試みた。即ち、キメラ抗原発現pDNAを遺伝子導入することで、代表的な抗原提示細胞である樹状細胞(DC)内での抗原の挙動を制御し、これによる抗原提示の増強を試みた。モデル抗原として卵白アルブミンのMHCクラスIエピトープペプチド(Pep ; SIINFEKL)を選択し、これを発現するpDNAを構築した。その際、N末側に小胞体(ER)輸送シグナルを融合することでMHCクラスI分子の存在するERへのデリバリーを試みた(pPep)。また、C末側にER保持シグナル(pPep-ER)をはじめ種々のペプチド、アミノ酸を融合した。マウス樹状細胞株DC2.4細胞に遺伝子導入後の抗原提示活性を評価したところ、pPepでは全く抗原提示が起きなかったのに対し、pPep-ERの場合には、有意に高い抗原提示活性が得られた。pPep-ERは、マウスに皮内投与することで高い細胞傷害性Tリンパ球反応が得られたことから、目的分子の細胞内動態制御による活性増強が実現された。