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低分子量G蛋白質PhoとProtein kinase Nの複合体の立体構造解析

低分子量G蛋白Pho与蛋白激酶N复合物的三维结构分析

基本信息

批准号：
08780655
负责人：
白川昌宏
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780655/
关键词：
低分子量G蛋白質 NMR 細胞骨格 Pho

项目摘要

本研究の目的は真核生物の細胞内シグナル伝達を担い、様々な細胞機能を制御している低分子量G蛋白質スーパーファミリーに属するPhoとその標的蛋白質であるPKNとの相互作用を立体構造的に明らかにすることである。具体的にはPKNのPho結合ドメインとPhoの構造とそれらの複合体の溶液中での立体構造を、多重共鳴多次元NMRにより原子レベルで決定する。Phoはアクトミオシン系を介して細胞形態の維持や細胞運動、細胞質分裂、平滑筋の収縮などを制御すると考えられている。Pho蛋白質についてはC末端の脂質結合部位を除く181残基に対応する部分を大腸菌に発現させ、大量調整することにより1次元^1H-NMRスペクトル、2次元^1H-^<15>N HSQCスペクトルの測定を行い蛋白質が安定な立体構造を保持することを示した。また1次元^<31>P-NMRスペクトルの測定による結合したヌクレオシドの同定を行った。Protein kinase NのPho結合ドメインの大腸菌による発現と精製を試みたが大腸菌由来のプロテアーゼによる消化を受けやすく、大量かつ安定な試料調整が極めて困難であった。PhoキナーゼのPho結合ドメインは大腸菌から大量に調整することが出来、2次元^1H-^<15>N HSQCスペクトル測定を行った。その結果、単独では溶液中でランダムな構造を取っていることが推察された。しかしPhoとの結合により立体構造変化を起こすことが示唆されるデータが得られた。

The aim of this study is to investigate the role of PKN in intracellular protein expression and cellular function regulation in eukaryotic organisms. The specific structure of the PKN and Pho complexes in solution is determined by the stereo structure and multiple resonance multiple element NMR. Pho is responsible for the maintenance of cell morphology, cell movement, cytoplasmic division, smooth muscle contraction, and control. The lipid binding site at the C-terminal of the Pho protein was detected in E. coli except for residue 181, which was largely regulated by 1H-NMR. <15>The protein was determined to be stable and stereostructured. 1-D <31>P-NMR measurements are performed in conjunction with the determination of the same parameters. Protein kinase N Pho binding to Escherichia coli production and purification of the test, the origin of Escherichia coli digestion, a large number of stable sample adjustment is extremely difficult. Pho, Pho, Pho<15>. The result is that the structure of the solution can be inferred from the solution. The combination of the three dimensional structure is very important.