真核生物の転写調節因子複合体の溶液中での立体構造解析

溶液中真核转录调控因子复合物的三维结构分析

• 批准号: 08250218
• 负责人: 白川 昌宏
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08250218/
• 关键词: 遺伝子転写; 転写メディエーター; コアクチベータ-; 立体構造; NMR

本研究の目的はカイコの発生に関わる制御するfushi tarazu遺伝子発現を制御するMBF1とFTZ-F1、ヒトの転写コアクチベータ-であるPC4などのDNA結合性、非結合性転写因子の溶液中での立体構造を決定し、遺伝子転写における転写因子間の蛋白質-蛋白質相互作用、転写因子の制御配列DNAの分子認識機構を立体構造的に明らかにすることである。手法としては核磁気共鳴法(NMR)を用いる遺伝研・上田均博士らとの共同研究として、昆虫の脱皮・変態に関わる転写因子FTZ-F1及び、そのメディエーターであるMBF1の立体構造解析を行った。MBF1のプロテアーゼによる限定分解により67-180の113残基からなるドメイン(MBF1コア)が溶液中で安定な立体構造を保持する構造ドメインを形成すること、またそのドメインがTBPと結合する活性を有することを明らかにした。多重共鳴多次元NMR法によりほぼ全ての原子核シグナルの帰属を終了した。得られた帰属を基に原子核間距離情報、角度情報を収集し、化学シフト値の情報と共に2次構造決定を行ったところ4つのヘリックスを持つことが判った。さらに溶液中での立体構造計算を行い、予備的な立体構造を得た。その結果、塩基性残基が多く見られるクレフトを持つヘリックスバンドル構造を持つことなどが示された。阪大・細胞生体工学センター大熊博士と共同研究を進めているヒトPC4についてもトリプシンによる限定分解とNMRスペクトル測定の結果、全長127アミノ酸残基中C末端の74残基の部分が安定な立体構造を溶液中で形成することが判明した。当該部分は少なくとも一本鎖DNAとの結合活性が有ることが知られている。これと他の転写因子との結合活性を調べると共に立体構造解析に向けてのNMR測定を進めている。

The purpose of this study is to determine the binding and non-binding properties of fushi tarazu FTZ-F1, DNA binding, non-binding writing factors, protein-protein interaction between writing factors, and protein-protein interaction between writing factors. The purpose of this study is to determine the interaction between proteins and proteins in the solution of two-dimensional writing factors, such as the control of MBF1 FTZ-F1, DNA binding, non-binding, protein-protein interaction and so on. The writing factor controls the three-dimensional system created by the DNA molecular intelligence institution. The manipulation and nuclear magnetic resonance (NMR) method was used to study Dr. Yoshihiro Ueda in order to jointly study the factors FTZ-F1 and MBF1 of insect desquamation and desquamation. MBF1 was used to limit the decomposition of residues 67-180. 113residues. In MBF1 solution, the diazepam was stereoscopically built. The stability was maintained in the solution. In the solution, the diazepam was formed. The activity was determined by the combination of molecular weight and TBP. The multi-element NMR method is used to measure the whole nucleus of the atom. The results show that the distance between the nucleus and the core of the atom, the angle of the nucleus, the distance of the nucleus, the distance of the nucleus, the angle of the nucleus, the distance of the nucleus, the location of the nucleus, the distance of the nucleus, the location of the nucleus, the distance of the nucleus, the location of the nucleus, the distance of the The calculation of the three-dimensional structure in the solution is feasible, and the production of the equipment is obtained. The results of the test, the results of the results, the results of the results, the results and the results. Dr. Osaka Dazhong, Ph.D., of Sakata University, has jointly studied the results of the determination of the limited decomposition of PC4 in the stereospecific solution for the determination of the stability of the 74 residues at the C-terminal in the full-length acid residues. When this part of the book is used to check the activity of a DNA book, you will know how to do it. In this paper, the other factors were combined with the active factors, and the stereo analysis was used to determine the accuracy of the NMR.

项目成果

Takahisa Ikegami: "An Efficient HN(CA)NH Pulse Scheme for Triple-Resonance 4D Correlation of Sequential Anade Protons and Nitrogen-15 in Deulerated Proteins." Journal of Magnetic Resonance B. 124. 214-217 (1997)

Takahisa Ikegami：“一种高效的 HN(CA)NH 脉冲方案，用于脱氢蛋白质中连续 Anade 质子和 Nitrogen-15 的三重共振 4D 相关性。”

Hiroshi Matsuo: "Backbone Dynamics of the λ-Cro Repressor Protein Determined by 15N Relaxation Measurements-Application of an Efficient Method for Calculation of Dynamics Parameters." Journal of Molecular Structure. 379. 143-150 (1996)

Hiroshi Matsuo：“通过 15N 弛豫测量确定 λ-Cro 阻遏蛋白的骨架动力学 - 计算动力学参数的有效方法的应用。” 分子结构杂志 379. 143-150 (1996)。

Hiroshi Imahori: "Linkage and Solvent Dependence of Photoinduced Electron Transfer in Zincporphyrin-C60 Dyads." Jouranal of the American Chemical Society. 118. 11771-11782 (1996)

Hiroshi Imahori：“锌卟啉-C60 二元体中光诱导电子转移的联系和溶剂依赖性。”

Eugene H,Morita: "Implications of the zinc-finger motif found in the DNA-binding domain of the human XPA protein." Genes to Cells. 1. 437-442 (1996)

Eugene H，Morita：“在人类 XPA 蛋白 DNA 结合域中发现的锌指基序的含义。”

永田 恭介: "積み木細工の生物学 タンパク質と遺伝子の機能単位." 共立出版株式会社, 203 (1996)

永田恭介：“构件生物学：蛋白质和基因的功能单位。”共立出版有限公司，203 (1996)