PEBP-2のDNA結合:ヘテロダイマー形成の構造学的研究

PEBP-2 的 DNA 结合：异二聚体形成的结构研究

• 批准号: 06780534
• 负责人: 白川 昌宏
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780534/
• 关键词: NMR; DNA結合蛋白質; 立体構造解析; PEBP2; 転写制御; ヘテロダイマー

本研究ではマウス・ポリオーマ・ウイルス・エンハンサー結合蛋白質-2(PEBP2)αサブユニットのDNA結合ドメインなどの溶液中での立体構造を核磁気共鳴法で決定し、加えてDNAと複合体の解析も進めることによって、DNA塩基配列の認識機構を立体構造に基づいて明らかにすることを目的とした。今年度はマウス・ポリオーマ・ウイルス・エンハンサー結合蛋白質-2(PEBP2)αサブユニットに関してはDNA結合と βサブユニットとのヘテロダイマー形成能を持つ139残基からなるドメインについて、融合蛋白質を利用した大量産製システムを導入し、NMR測定に必要な量の試料を調整することが出来るようになった。PEBP2についてはすでに水素核-窒素核相関2次元NMRスペクトル測定を既に行っている。また、ドメイン中に2つあるCys残基の少なくとも一つをGlyに変異したものは結合活性や安定性が顕著に上昇していることが、共同研究者である重定博士らによって明らかにされているので、その変異体の大量産製システムも構築しようとしている。このPEBP2αのDNA結合ドメイン、βとのヘテロダイマードメインとも立体構造的には殆ど明らかになっておらず、また既知のDNA結合モチーフを持つとは考えられていない。またβドメインはDNA結合に直接関わっていないにも関わらず、ヘテロダイマーではDNA結合が強められると言う構造学上興味深い現象を示す。従って、これらの立体構造決定をする事によって新しいDNA塩基配列認識の構造モチーフを見つけだせることが期待できる。

In this study, the stereostructure of DNA binding protein-2 (PEBP2)α-B-binding protein in solution was determined by nuclear magnetic resonance (NMR), and the analysis of DNA complex was carried out. This year, the protein binding protein-2 (PEBP2)α-protein binding protein is related to DNA binding and β-protein binding, and the fusion protein can be produced in large quantities by using 139 residues. PEBP2 is the first step in the determination of nuclear-2-D NMR. Cys residues are reduced in number, Gly is changed in number, binding activity is increased, stability is increased, co-investigators are redefined, and heterogenous mass production systems are constructed. The DNA binding mechanism of PEBP2 α, β, and β is closely related to the three-dimensional structure of PEBP2 α. DNA binding is directly related to DNA binding, which is structurally interesting. The structure of DNA base alignment is expected to be determined in the future.

项目成果

E.H.Morita: "Structure of the Oct-3 POU-homeodomain in Solution,as Determined by Triple Resonance Heteronclear Multidimensional NMR Spectroscopy" Protein Science. (in press).

E.H.Morita：“溶液中 Oct-3 POU-同源结构域的结构，通过三重共振异质多维 NMR 光谱测定”蛋白质科学。

M.Shirakawa: "The use of heteronuclear cross polarization for backbone assignment of 2H,15Nand 13C-labeled proteins ; A pulse scheme for triple resonance 4D ccrreletior of sequential amide proton and nitrogen-15" J.Biomol.NMR. (in press).

M.Shirakawa：“使用异核交叉极化进行 2H、15N 和 13C 标记蛋白质的主链分配；连续酰胺质子和氮 15 的三重共振 4D 关联的脉冲方案”J.Biomol.NMR。

K.Uegaki: "Secondary structure and folding topology of the DNA binding domain of interferon regulatory factor 2,as reveraled by NMR soectroscopy" FEBS Letters. 359. 184-188 (1995)

K.Uegaki：“干扰素调节因子 2 的 DNA 结合域的二级结构和折叠拓扑，如 NMR 透视所示” FEBS Letters。

H.Asahina: "The XPA protein is a zinc metalloprotein with an ability to recognize various kinds of DNA damage" Mutation Research. (in press).

H.Asahina：“XPA 蛋白是一种锌金属蛋白，具有识别各种 DNA 损伤的能力”突变研究。

K.Uegaki: "Unique Structure of the DNA Binding Domain of Interferon Regulatory Factor 2 Determined by NMR Spectroscopy" Proceedings of the Japan Academy. 70B. 200-204 (1994)

K.Uegaki：“通过 NMR 光谱测定干扰素调节因子 2 的 DNA 结合域的独特结构”日本科学院院刊。