運動ニューロンの系統変性過程の分子機構の解析

运动神经元谱系变性过程的分子机制分析

• 批准号: 09770453
• 负责人: 伊東 大介
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770453/
• 关键词: 運動ニューロン; 軸索切断; アポトーシス; アストログリア; ミクログリア; 再生; 変性; 軸策切断

新生ラットの顔面神経を末梢にて切断し、経時的(6、12、18、24時間、1、3日後)に組織切片を作製し、TUNEL法にて、運動ニューロン細胞死の出現を検討したところ、TUNEL陽性細胞は切断後24時間をピークに観察された。従って、軸索切断にて誘導される運動ニューロン細胞死のプロセスは、切断後24時間の間に進展していると考えられた。同様に、運動ニューロンの再生が観察される若齢ラットの顔面神経切断では、TUNEL陽性細胞は観察されなかった。また、アポトーシスにおいて染色される抗poly(ADP-ribose)抗体による免疫染色も行ったが有意な染色性は認められなかった。次に、顔面神経核運動ニューロンのアポトーシス過程において、caspaseの活性化を検討するため、punch outした顔面神経核より蛋白質を調整し抗caspase-3抗体を用いて、ウェスタンプロットを行った。caspase-3は活性化過程で20kDaと10kDaにプロセシングされていることが報告されているが、顔面神経核での発現量は乏しく、活性化の確認は困難であった。近年、活性化型caspase-3を認識する抗体が報告されてきており、今後は、caspase活性の生化学的測定、もしくは前述の抗体を使用して検討を進めたいと考えている。

Tissue sections were prepared at 6, 12, 18, and 24 hours after neurolysis, and TUNEL positive cells were observed at 24 hours after neurolysis. In addition, the cell death was induced by axonal transection, and the cell death was induced by axonal transection. In the same way, TUNEL positive cells were detected when the nerve was cut off. The anti-poly (ADP-ribose) antibody was used for immunostaining. The expression of caspase-3 is regulated by the expression of caspase-3 antibody in the process of expression of caspase-3 in the brain. The activation of caspase-3 was 20kDa and 10kDa, and the expression of caspase-3 in the facial nucleus was insufficient. The confirmation of caspase-3 activation was difficult. In recent years, antibodies to activated caspase-3 have been reported, and in the future, biochemical measurements of caspase activity have been carried out to further discuss the use of the antibodies.

项目成果

Ohsawa K: "Molecular cloning and characterization of Annexin V-Binding protein with highly Hydrophilic peptide Structure" J.Neurochemistry. 67. 89-97 (1995)

Ohsawa K：“具有高度亲水性肽结构的膜联蛋白 V 结合蛋白的分子克隆和表征”J.Neurochemistry。

Ito D: "Dynamic observation of cultured vascular endothelium under Video-Enhanced Microscopy(VEC)." Microcirculation annual. 9. 159-160 (1993)

Ito D：“视频增强显微镜 (VEC) 下培养血管内皮的动态观察。”

Ito D: "Microglia-specific localisation of a novel calcium binding protein, Ibal" Mol.Brain Res.57. 1-9 (1998)

Ito D：“新型钙结合蛋白 Ibal 的小胶质细胞特异性定位”Mol.Brain Res.57。

Ohasawa K.: "Molecular Cloning and Characterization of Annexin V-Binding proteir with highly Hydrophilic Peptide Structure" J.Neurochemistry. 67. 89-97 (1995)

Ohasawa K.：“具有高度亲水性肽结构的膜联蛋白 V 结合蛋白的分子克隆和表征”J.Neurochemistry。

Ito D: "Dynamic observation of cultured vascular endothelium under Video-Enhanced Micro scopy(VEC)" Microcirculation annual. 9. 159-160 (1993)

Ito D：“视频增强显微镜（VEC）下培养血管内皮的动态观察”微循环年度。