CGH法による悪性黒色腫の早期病変における遺伝子変化の検索

利用CGH方法寻找恶性黑色素瘤早期病变的基因变化

• 批准号: 09770620
• 负责人: 宇原 久
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770620/
• 关键词: 悪性黒色腫; 遺伝子; CGH法; HSH法; Comparative genomic hybridization(CGH); melanoma

これまで新鮮凍結標本を用いて、研究方法の確立および結果の再現性について検討を行ってきた。(材料および方法)本邦人に発生し、かつ日光紫外線の関与が少ないタイプの悪性黒色腫原発巣10例(全てlevel III以上)、皮膚転移巣4例、リンパ節転移巣2例(計16例)、脂漏性角化症3例、ケラトアカントーマ3例の新鮮材料よりDNAを抽出後、Nick translation法でspectrumgreen-dUTPを用いて標識した。同様に正常人リンパ球から抽出したDNAをspectrumred-dUTPで標識した。DNAの純化後、Cot-1 DNAを加え、その後熱処理による変性を行った。常法通り作成し保存してある正常人末梢リンパ球染色体標本を熱変性後、脱水し、上記標識後の腫瘍細胞DNAおよび正常リンパ球DNAを標本上に乗せハイブリダイズを行った。DAPIによる染色体の対比染色を行った後に蛍光顕微鏡下でspectrumgreen、spectrumred、DAPIそれぞれの染色像を1検体当たり約20個の染色体標本についてCCDカメラでデジタルgray scaleイメージとして取り込み、それぞれに疑似カラーを与え重ねた後、3種の合成イメージを作った。合成色のシグナル強度をスキャンし欠失あるいは増幅している染色体部位を特定した(Cyto Vision A/W,APPLIED IMAGING社を使用)。(結果)解析が可能であった悪性黒色腫症例は16例中13検体で、2症例は原発巣と転移巣の比較が可能であった。1検体当たりの解析可能染色体標本数は8〜24個であった。原発巣におけるchromosomeimbalancesは欠失が染色体1,9,11,13-16,19,21に、増幅が10,15,16,21,22,XYを除く染色体にみられたが症例毎にかなりの多様性を示した。また、原発巣と転移巣間の比較では、両者間の染色体の変化は概ね一致しており、さらに1例は6q,8,14qに、もう1例は1p,4q,9pに転移後の変化がみられ、CGH法がこの種の比較に非常に有用であるとの印象を持った。現在、原発巣と転移巣の両者の病変を持つ症例を増やすと共に良性病変についても検討を進めている。

こ れ ま で を fresh frozen specimen with い て, establishment of research methods の お よ び results の reproducibility に つ い て 検 line for を っ て き た. (material お よ び method) the gentiles に 発 し, か つ solar ultraviolet の masato and less が な い タ イ プ の 悪 sex is black color is swollen original 発 巣 10 cases (all て level III above), 4 cases were moving skin planning 巣, リ ン パ festival planning move 巣 in 2 cases (16 cases), grease leakage keratinization disease (3 cases), ケ ラ ト ア カ ン ト ー マ 3 cases の fresh material よ り DNA を after extraction, Nick translation method で spectrumgreen - dUTP を with い て logo し た. The same に normal person リ リ パ パ sphere ら ら the <s:1> たDNAをspectrumred-dUTPで was extracted to identify the た. After DNA purification, Cot-1 DNA is を followed by え and そ, then thermally treated with による variable を and った. Method through り often done し save し て あ る normal peripheral リ ン パ ball chromosome specimen を hot - sex, dehydrated し, written logo after の swollen sores cell DNA お よ び normal リ ン パ ball を DNA samples on に 乗 せ ハ イ ブ リ ダ イ ズ を line っ た. DAPI に よ る chromosome の than dyeing を seaborne っ た after に 蛍 optical 顕 microscopically で spectrumgreen, spectrumred, DAPI そ れ ぞ れ の dyeing like を 1 検 body when た り about 20 の chromosome specimen に つ い て CCD カ メ ラ で デ ジ タ ル gray Scale イ メ ー ジ と し て in り 込 み, そ れ ぞ れ に suspected カ ラ ー を and え weight ね た after, three の synthetic イ メ ー ジ を as っ た. Strength of composites の シ グ ナ ル を ス キ ャ ン し owe lost あ る い は rights of し て い る chromosome specific し を た (Cyto Vision A/W, APPLIED を IMAGING club use). (results) resolution が may で あ っ た 悪 sex is black color is swollen cases は 13 検 body で in 16 cases, 2 cases は original 発 巣 と planning move 巣 の is が may で あ っ た. The number of possible chromosome specimens 検 is 8 to 24 であった. Original 発 巣 に お け る chromosomeimbalances は owe lost が,9,11,13 chromosome 1-16,19,21 に, raised が 10,15,16,21,22, XY を except く chromosome に み ら れ た が cases in their に か な り の multiple others を shown し た. ま た, original 発 巣 と の comparison between planning move 巣 で は, struck between の chromosome の variations change are consistent ね し は て お り, さ ら に 1 case は q 6, 8, 14 q に, も う 1 case は 1 p and q 4, 9 p に の after planning to move - the が み ら れ, CGH が こ の kinds の is very useful に で に あ る と の impression を hold っ た. Now, original 発 巣 と planning move 巣 の struck is の disease - を hold two cases つ を raised や す と altogether に benign disease - に つ い て も beg を 検 into め て い る.