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胆管側膜上有機アニオン輸送担体および関連蛋白とチャンネル機能の協関

胆管膜有机阴离子转运载体与相关蛋白的配合及通道功能

基本信息

批准号：
09257211
负责人：
杉山雄一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257211/
关键词：
ABC輸送担体 cMOAT MRP MLP 胆汁排泄多剤耐性

项目摘要

前年度科学研究費のサポートを得て、ラット胆管側膜上に存在し、グルタチオンおよびグルクロン酸抱合体を含む種々有機アニオン系化合物の胆汁排泄に関与するcanalicular multispecific organic anion transporter(cMOAT)のcDNAクローニングを完了し、cMOAT機能を遺伝的に欠損するラットEisai hyperbilirubinemic rat(EHBR)における変異機構を同定してきた。今年度は、クローン化したcDNA産物の機能を決定すると共に、cMOAT関連蛋白のcDNAクローニングに関して検討を加えた。cMOATcDNAを哺乳類発現ベクターpCXN2にsubcloningし、NIH3T3細胞にtransfectした。G418存在下で得られた安定遺伝子導入株に対しNorthern blotによりcMAOT高発現株を採取し、膜ベシクルを調製した。膜ベシクルにおけるcMOAT基質2,4-dinitrophenyl-S-glutathione(DNP-SG)の輸送を測定したところ、ATP依存性が観察されたが、GTP,CTP,UTPもATPの約50%程度の促進効果を有することが示された。更に、ATPにより促進される輸送はK_m=0.175μMの飽和性を示した。一方、vectorのみを遺伝子導入した細胞株より調製した膜ベシクルにおいてもATPにより促進されるDNP-SG輸送活性が観察されたが、Northern blotの結果からNIH3T3細胞におけるマウスcMOATの発現が確認されたことから、この輸送はマウスcMOATに依る可能性が示唆された。本研究結果は、クローン化されたcMOATcDNA産物の機能を定量的に評価した初めての例である。

In the previous year, the scientific research has been successful, the presence of antigens on the biliary membrane, and the presence of several organic compounds in the bile duct, bile excretion compounds, bile excretion compounds and canalicular multispecific organic anion transporter (cMOAT) cDNA compounds have been successfully tested in the scientific research of the year before last, the presence of bile excretion compounds on the biliary membranes, bile excretion compounds, bile acids, bile acids, bile duct, bile, bile, bile, This year, we will be able to make a decision on how to increase the content of cDNA and cMOAT protein, such as protein, protein and protein. CMOATcDNA mammals have pCXN2 subcloning and NIH3T3 cells have transfect infection. In the presence of G418, diazepam, diazepam, diaz The effect of cMOAT (DNP-SG) on the determination of sensitivity, ATP dependence, and GTP,CTP,UTP ATP has been improved by about 50%. More and more, ATP equipment to promote the transmission of km = 0.175 μ M and sexual indicators. One party, vector cell line, cell line, The results of this study showed that there was a quantitative analysis of the quantitative characteristics of cMOATcDNA in this study.