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胆管側膜上有機アニオン輸送担体および関連蛋白とチャンネル機能の協関

胆管膜有机阴离子转运载体与相关蛋白的配合及通道功能

基本信息

批准号：
09257211
负责人：
杉山雄一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257211/
关键词：
ABC輸送担体 cMOAT MRP MLP 胆汁排泄多剤耐性

项目摘要

前年度科学研究費のサポートを得て、ラット胆管側膜上に存在し、グルタチオンおよびグルクロン酸抱合体を含む種々有機アニオン系化合物の胆汁排泄に関与するcanalicular multispecific organic anion transporter(cMOAT)のcDNAクローニングを完了し、cMOAT機能を遺伝的に欠損するラットEisai hyperbilirubinemic rat(EHBR)における変異機構を同定してきた。今年度は、クローン化したcDNA産物の機能を決定すると共に、cMOAT関連蛋白のcDNAクローニングに関して検討を加えた。cMOATcDNAを哺乳類発現ベクターpCXN2にsubcloningし、NIH3T3細胞にtransfectした。G418存在下で得られた安定遺伝子導入株に対しNorthern blotによりcMAOT高発現株を採取し、膜ベシクルを調製した。膜ベシクルにおけるcMOAT基質2,4-dinitrophenyl-S-glutathione(DNP-SG)の輸送を測定したところ、ATP依存性が観察されたが、GTP,CTP,UTPもATPの約50%程度の促進効果を有することが示された。更に、ATPにより促進される輸送はK_m=0.175μMの飽和性を示した。一方、vectorのみを遺伝子導入した細胞株より調製した膜ベシクルにおいてもATPにより促進されるDNP-SG輸送活性が観察されたが、Northern blotの結果からNIH3T3細胞におけるマウスcMOATの発現が確認されたことから、この輸送はマウスcMOATに依る可能性が示唆された。本研究結果は、クローン化されたcMOATcDNA産物の機能を定量的に評価した初めての例である。

In the past year, scientific research has been conducted to determine the existence, structure and function of the protein in the bile duct membrane, and the relationship between the protein and the bile excretion of canalicular-multispecific organic anion transporter (cMOAT). This year, the function of cMOAT-related cDNA products is determined. cMOAT cDNA is found in mammalian cells, such as pCXN2, NIH 3T3 and NIH 3T3. In the presence of G418, the stable vector introduced into the plant was isolated by Northern blot and the membrane was modulated. The transport of 2,4-dinitrophenyl-S-glutathione(DNP-SG) in the matrix of cMOAT was measured and ATP dependence was observed. The promoter effect of GTP,CTP,UTP and ATP was about 50%. Furthermore, ATP promoted the transport of K_m=0.175μM and showed saturation. The expression of cMOAT in NIH 3T3 cells was confirmed by Northern blot analysis. The results of this study provide a quantitative evaluation of the function of cMOAT cDNA products.