有機アニオン輸送の細胞内分子機序

有机阴离子转运的细胞内分子机制

• 批准号: 09257241
• 负责人: 遠藤 仁
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257241/
• 关键词: 近位尿細管直部; 有機アニオン; ジカルボン酸; トランスポーター; ジカルボン酸トランスポーター; 多選択性トランスポーター; 有機アニオントランスポーター; 交換輸送

有機アニオントランスポーターが交換輸送体(ジカルボン酸/有機アニオン交換輸送体)であることに着目し、その対向基質であるジカルボン酸を輸送するNa^+依存性ジカルボン酸トランスポーター(rNaDC-1)をラット腎poly(A)^+RNAと共にXenopus卵母細胞に発現させることにより、p-aminohippurate(PAH)を輸送する有機アニオントランスポーター(OAT1)のクローニングに成功した。OAT1は551アミノ酸よりなる12回膜貫通型の膜蛋白であった。ノーザンブロットでは、OAT1の発現は腎特異的であり、脳にわずかな発現を認めた。In situハイブリダイゼーションでは、OAT1は腎皮質、特にmedullary rayに強い発現を認め、OAT1のC-末端部に対して作製した特異抗体による免疫組織化学では、OAT1蛋白は近位尿細管の側底膜に限局していた。単離されたOAT1を単独で卵母細胞に発現させてもPAHの取り込みは認められるが、rNaDC-1と共発現させジカルボン酸の一つであるグルタール酸を前負荷すると、その取り込み活性は約10倍程度に増加した。またOAT1を発現した卵母細胞に^<14>C-PAHをあらかじめ取り込ませた後、OAT1の輸送基質を紬胞外に添加すると、細胞内の^<14>C-PAHが細胞外に排出されることが確認された。以上の結果はOAT1が交換輸送体であり、厳格な整流性は存在しないこと、Na^+非依存的な高親和性の輸送(Km=14.3μM)機能を有することが判明した。OAT1の基質特異性を^<14>C-PAH取り込みに対する阻害実験、および放射能標識された基質の取り込み実験で検討した。OAT1は構造の異なる様々な薬物(βラクタム系抗生物質、利尿薬、非ステロイド性抗炎症薬、尿酸排泄薬、ACE阻害薬、抗癌薬の一部等)やプロスタグランジン、cAMP、cGMP、尿酸等の内因性物質を認識していることが確かめられた。以上より、OAT1はこれまでその存在が想定されていた基質選択性の極めて広いmultispecific organic anion transporterである事が明らかとなった。

Organic transport system (rNaDC-1) rNaDC-1 rNaDC-1 rNaDC p-aminopurate (PAH) is successfully transmitted to the system. OAT1 OAT1 and OAT1 are recognized as kidney specific. In situ, OAT1 protein was strongly detected in renal cortex and in the basal membrane of proximal urinary tubules. OAT-1 alone produced PAH and its receptor activity increased by about 10-fold. OAT1 <14>is detected in oocytes, and OAT1 transport matrix is added extracellularly, and intracellular <14>C-PAH excretion is confirmed. The above results show that OAT1 has the ability to exchange transporters, improve rectification, and provide Na^+-independent high affinity transport (Km=14.3μM). OAT1 matrix specificity, <14>C-PAH matrix detection, and radiolabeled matrix detection are discussed. OAT1 is a member of the OAT1 family of drugs (beta antibiotics, diuretics, non-steroidal anti-inflammatory agents, uric acid excretors, ACE inhibitors, anticancer agents, etc.) and endogenous substances such as cAMP, cGMP, and uric acid. OAT1: The existence of the matrix is determined by the multispecific organic anion transporter.

项目成果

Kim,H.S.,Cha,S.K.,Abraham,D.G.,Cooper,A.J.L: "Intranephron distribution of cysteine S-conjugate β-lyase activity and its implication for hexachloro-1,3-butadiene-induced nephrotoxicity on rats." Arch.Toxicol.71. 131-141 (1997)

Kim, H.S.、Cha, S.K.、Abraham, D.G.、Cooper, A.J.L：“半胱氨酸 S-缀合物 β-裂合酶活性的肾内分布及其对六氯 1,3-丁二烯诱导的大鼠肾毒性的影响。”毒理学。71。131-141（1997）

Nosaka,K.,Takahashi,T.,Nishi,T.,Imaki.,H.,Suzuki,T.,Suzuki,K.,Kurokawa,K.&Endou,H.: "An adenosine deaminase inhibitor prevents puromycin aminonucleoside Nephrotoxicity" Free Radical Biol.Med.22(4). 597-605 (1997)

野坂K.、高桥T.、西T.、今木.、H.、铃木T.、铃木K.、黑川K.

長沢俊彦、河邉香月、伊藤克巳、浅野 泰、遠藤 仁: "Annual Review 腎臓 1998" 中外医学社, 239 (1997)

Toshihiko Nagasawa、Kazuki Kawabe、Katsumi Ito、Yasushi Asano、Hitoshi Endo：“Annual Review Kidney 1998”Chugai Igakusha，239（1997）

Takeda,M.,Kobayashi,M.,Shirato,I.,Osaki,T.&Endou,H.: "Cisplatin-induced apoptosis of immortalized mouse proximal tubule cells is mediated by interleukin-1β converting enzyme (ICE) family of proteases but inhibited by overexpression." Arch.Toxicol.71. 612-

Takeda, M.、Kobayashi, M.、Shirato, I.、Osaki, T. 和 Endou, H.：“顺铂 - 诱导永生化小鼠近端小管细胞的凋亡是由白细胞介素 1β 转换酶 (ICE) 家族介导的但会被过度表达所抑制。”Arch.Toxicol.71. 612-

Endou,H.,Kanai,Y.,Utsunomiya-Tate,N.&Hosoyamada,M.: "Contrib.Nephrol."Nutritional and acid-base aspects of amino acid metabolism"" Karger, 172 (1997)

远藤 H.、金井 Y.、宇都宫立 N.