有機アニオン輸送の細胞内分子機序

有机阴离子转运的细胞内分子机制

基本信息

批准号：
09257241
负责人：
遠藤仁
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

有機アニオントランスポーターが交換輸送体(ジカルボン酸/有機アニオン交換輸送体)であることに着目し、その対向基質であるジカルボン酸を輸送するNa^+依存性ジカルボン酸トランスポーター(rNaDC-1)をラット腎poly(A)^+RNAと共にXenopus卵母細胞に発現させることにより、p-aminohippurate(PAH)を輸送する有機アニオントランスポーター(OAT1)のクローニングに成功した。OAT1は551アミノ酸よりなる12回膜貫通型の膜蛋白であった。ノーザンブロットでは、OAT1の発現は腎特異的であり、脳にわずかな発現を認めた。In situハイブリダイゼーションでは、OAT1は腎皮質、特にmedullary rayに強い発現を認め、OAT1のC-末端部に対して作製した特異抗体による免疫組織化学では、OAT1蛋白は近位尿細管の側底膜に限局していた。単離されたOAT1を単独で卵母細胞に発現させてもPAHの取り込みは認められるが、rNaDC-1と共発現させジカルボン酸の一つであるグルタール酸を前負荷すると、その取り込み活性は約10倍程度に増加した。またOAT1を発現した卵母細胞に^<14>C-PAHをあらかじめ取り込ませた後、OAT1の輸送基質を紬胞外に添加すると、細胞内の^<14>C-PAHが細胞外に排出されることが確認された。以上の結果はOAT1が交換輸送体であり、厳格な整流性は存在しないこと、Na^+非依存的な高親和性の輸送(Km=14.3μM)機能を有することが判明した。OAT1の基質特異性を^<14>C-PAH取り込みに対する阻害実験、および放射能標識された基質の取り込み実験で検討した。OAT1は構造の異なる様々な薬物(βラクタム系抗生物質、利尿薬、非ステロイド性抗炎症薬、尿酸排泄薬、ACE阻害薬、抗癌薬の一部等)やプロスタグランジン、cAMP、cGMP、尿酸等の内因性物質を認識していることが確かめられた。以上より、OAT1はこれまでその存在が想定されていた基質選択性の極めて広いmultispecific organic anion transporterである事が明らかとなった。

关注有机阴离子转运蛋白是一种交换转运蛋白（二羧酸/有机阴离子交换转运蛋白），有机阴离子转运蛋白转运蛋白（OAT1）成功地克隆了p-氨基磷酸盐（PAH），通过表达Na^+ - 依赖性的二羧酸转运式转运（RNADC-1），成功地克隆了na^+ - 依赖的二羧酸转运（RNAD）。（RNADC-1），以及爪诺司卵母细胞中的大鼠肾poly（A）^+RNA。 OAT1是由551个氨基酸组成的12跨膜膜蛋白。在北印迹上，OAT1表达是肾脏特异性的，并且在大脑中观察到轻微的表达。原位杂交，OAT1在肾皮质中，尤其是在髓样射线中，并在与OAT1的C-末端产生的特定抗体中强烈表达，OAT1蛋白被定位于近接头管的基底膜。尽管当与RNADC-1共表达并与谷氨酸（一种二羧酸）共表达时，尽管在卵母细胞中单独表达了分离的OAT1时观察到PAH摄取，但摄取活性增加了约10倍。此外，已经证实， ^<14> c-pAh被预先合并到表达OAT1的卵母细胞中，然后当在细胞外添加OAT1转运底物时，细胞内 ^<14> C-PAH在细胞外排出。上述结果表明OAT1是一种交换转运蛋白，没有严格的整流，并且具有Na^+ - 独立的高亲和力转运（km =14.3μm）功能。 OAT1的底物特异性在 ^<14> C-PAH摄取的抑制实验中进行了研究，并对放射性标记的底物进行了掺入实验。已经证实，OAT1识别各种具有不同结构的药物（β-内酰胺抗生素，利尿剂，非甾体类抗炎药，尿酸排泄药物，ACE抑制剂，某些抗癌药等）和诸如Prostaglandins，Camp，Cgmp和cgmp和cgmp和cgmp和cycic cid cyciv。从上面可以看出，OAT1是一种多特异性有机阴离子转运蛋白，具有极宽的底物选择性，以前已经预期。