放線菌の細胞間情報伝達物質A-factorの受容体のX線結晶構造解析

放线菌细胞间信号递质A因子受体的X射线晶体结构分析

• 批准号: 09780543
• 负责人: 千田 俊哉
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nagaoka University of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780543/
• 关键词: X線結晶構造解析; 放線菌; 情報伝達; A-factor; DNA結合蛋白質; 情報伝達物質; 結晶; 立体構造; 受容体; 細胞間情報伝達

CprBは、Streptomyces中での情報伝達に関よするDNA結合蛋白質で、2次代謝物の生産や、形態分化に重要な働きをしている。本研究では、立体構造が未知である本蛋白質の立体構造解明を目指し、X線結晶構造解析を行った。1. 精製及び結晶化CprBの発現はT7プロモータを使用した大腸菌の系で行った。精製は、3段階のクロマト操作により行った。結晶化は通常の蒸気拡散法で行い、約0.2mmほどの結晶を得ることができた。本結晶は、約2.5Aまでの回折像を与える。回折パターンの解析より、本結晶の空間群はP2_12_12_1であることが明らかになった。幾つかの回折データを解析した結果、良く似た格子定数をもつ結晶が多く存在することを見出した。このことが、本解析を非常に困難なものとした。2. 新しいデータ測定法の開発本結晶は、通常行われているように結晶をキャピラリーに封入してデータを測定することが不可能であったため、極低温下(100K)での測定を行った。また、格子定数の少しずつ違う結晶が多く存在するため、一つの結晶で、native及びderivativeのデータを収集する方法を開発し、水銀の誘導体を得ることに成功した。現在、この水銀の位置を差のパターソン図より決定し、初期位相が得られている。立体構造解析を完成させるには、あと、2-3個の重原子同型置換体を見出す必要があるが、既に初期位相が得られているため、以降の実験は比較的容易に行えると考えられる。

CprB は, Streptomyces で の intelligence 伝 da に masato よ す る DNA binding protein で, 2 secondary metabolites の production や, morphological differentiation に important な 働 き を し て い る. In this study, で で, the three-dimensional structure が is unknown である, the <s:1> three-dimensional structure of this protein is clarified を, the objective is った, and the X-ray crystal structure is analyzed を lines った. Refined and び crystallized CprB samples are found to be プロモ T7プロモ <s:1> タを using the <s:1> た escherichia coli <s:1> line で for った. Refined ロ, 3-step sequence ロ ロ ト operation によ ト line った. Crystallization ほ is usually carried out by the <s:1> vapor 拡 dispersion method で, and about 0.2mmほ <s:1> <s:1> crystallization を results in る とがで とがで とがで た た た. This crystal を, approximately 2.5Aまで <s:1> fold image を and える. Fold back to パタ, パタ, <s:1>, analysis of よ, よ, the <s:1> space group of this crystal, よ P2_12_12_1, である, である, とが, and ら ら になった になった. Several つ か の inflexion デ ー タ を parsing し た results, good く た lattice constant を も つ crystallization が す more く る こ と を shows し た. The analysis of を is very に difficult な な と と と た た. 2. New し い デ ー タ measurement の 発 open the crystallization は, usually わ れ て い る よ う に crystallization を キ ャ ピ ラ リ ー に し sealed て デ ー タ を determination す る こ と が impossible で あ っ た た め, extremely low temperature (100 k) で の line measurement を っ た. Less ま た, lattice constant の し ず つ violations う crystallization が す more く る た め, a つ の crystallization で, native and び derivative の デ ー タ を 収 set す る method を open 発 し, mercury の induced body を る こ と に successful し た. Now, the position of the <s:1> mercury <s:1> is を, the difference is パタ, パタ, ソ, <s:1>, よ and よ determine that the <s:1>, initial phase が is られて, る, る. Three-dimensional structure parsing を complete さ せ る に は, あ と, 2-3 の heavy atom type with the replacement body を show the necessary が す あ る が, both に initial phase が ら れ て い る た め, with の be 験 は more easily に line え る と exam え ら れ る.

项目成果

Sugimoto,K,Aoshima,H.,Senda,T.,Masai,E,Fukuda,M.& Mitsui,Y: "Purification and crystallization of a protocatecuate 4,5-dioxygenase LigAB form Sphingomonas paucimobilis SYK-6." Protein and Peptide Letters. 6. 55-58 (1999)

杉本K、青岛H、千田T、马西E、福田M。

Mitsui,Y. & Senda,T.: "Elucidation of the basic three-dimensional structure of Type I interferons and its functional and evolutionary implications." J.Interferon and Cytokine Res.17. 319-326 (1997)

三井，Y.

千田俊哉: "構造生物学のフロンティア(ヘリカルサイトカインとその受容体の構造と機能)" 共立出版, 7(318-324) (1999)

Toshiya Senda：“结构生物学前沿（螺旋细胞因子及其受体的结构和功能）”Kyoritsu Shuppan，7（318-324）（1999）

Nandhagopal, N.,Senda, T.,Hatta, T.,Yamada, A.,Masai, E,Fukuda,M. & Mitsui,Y.: "Three-dimensional structure of microbial 2-hydroxy-6-oxo-6-phenylhexa-2,4-dienoic acid (HPDA) hydrolase (BphD enzyme) from Rhodococcus sp.stratin RHAI,in the PCB degradation p

Nandhagopal，N.，Senda，T.，Hatta，T.，Yamada，A.，Masai，E，Fukuda，M。