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放線菌の細胞間情報伝達物質A-factorの受容体のX線結晶構造解析

放线菌细胞间信号递质A因子受体的X射线晶体结构分析

基本信息

批准号：
09780543
负责人：
千田俊哉
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

CprBは、Streptomyces中での情報伝達に関よするDNA結合蛋白質で、2次代謝物の生産や、形態分化に重要な働きをしている。本研究では、立体構造が未知である本蛋白質の立体構造解明を目指し、X線結晶構造解析を行った。1. 精製及び結晶化CprBの発現はT7プロモータを使用した大腸菌の系で行った。精製は、3段階のクロマト操作により行った。結晶化は通常の蒸気拡散法で行い、約0.2mmほどの結晶を得ることができた。本結晶は、約2.5Aまでの回折像を与える。回折パターンの解析より、本結晶の空間群はP2_12_12_1であることが明らかになった。幾つかの回折データを解析した結果、良く似た格子定数をもつ結晶が多く存在することを見出した。このことが、本解析を非常に困難なものとした。2. 新しいデータ測定法の開発本結晶は、通常行われているように結晶をキャピラリーに封入してデータを測定することが不可能であったため、極低温下(100K)での測定を行った。また、格子定数の少しずつ違う結晶が多く存在するため、一つの結晶で、native及びderivativeのデータを収集する方法を開発し、水銀の誘導体を得ることに成功した。現在、この水銀の位置を差のパターソン図より決定し、初期位相が得られている。立体構造解析を完成させるには、あと、2-3個の重原子同型置換体を見出す必要があるが、既に初期位相が得られているため、以降の実験は比較的容易に行えると考えられる。

CprB is important for information transfer, DNA-binding proteins, secondary metabolite production, and morphological differentiation in Streptomyces. In this study, the three-dimensional structure of this protein is unknown. The three-dimensional structure of this protein is clarified. The X-ray crystal structure is analyzed. 1. Purification and Crystallization of CprB Using Escherichia coli 3-stage operation Crystallization is usually carried out by evaporation method, about 0.2mm, and crystallization is obtained. This crystal is about 2.5A. The space group of this crystal is P2_12_12_1 The result of the analysis is that the number of crystals in the lattice is determined by the number of crystals. This analysis is very difficult. 2. The development of the new method of determination is usually carried out at very low temperatures (100 K). A method for the formation of crystals, native and derivative molecules has been developed successfully. Now, the position of mercury is different from that of the initial phase. Three dimensional structure analysis is completed, two or three heavy atom isoforms are found, and the initial phase is obtained, and the comparison is easy.