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物理化学的解析に適した高分子量型クロマチン因子群の大量発現系の開発

开发适合理化分析的高分子量染色质因子的质量表达系统

基本信息

批准号：
21657030
负责人：
千田俊哉
金额：
$ 1.92万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、大腸菌由来のTacプロモータとコリネ型細菌由来のCspBプロモータを利用して異種タンパク質(ヒストンシャペロンCIAおよびTAF-Iβ)の発現を試みた。CIAおよびTAF-Iβには、精製用にHis-タグを付与した。発現したタンパク質をアフィニティ精製したところ、CIAはTacプロモータで、TAF-IβはCspBプロモータで発現可能であることがわかった。プロモータと発現タンパク質の組み合わせに相性が認められたが、両プロモータはコリネ型細菌を用いた異種タンパク質発現に有効であることがわかった。しかし、コリネ型細菌の菌体破砕効率が低く、発現させたタンパク質の回収効率が低いという問題があった。そこでPhoDタンパク質の分泌シグナル配列を利用し、菌体破砕を必要としない分泌発現を試みた。CIA,TAF-Iβに分泌シグナルを融合しCspBプロモータで発現させたが、発現タンパク質の菌体外への分泌は確認できなかった。問題解決の別法として、菌体破砕を容易にするペニシリンG添加に応答するプロモータをタンパク質発現に利用し、組換えタンパク質発現と菌体破砕効率の向上を同時に実現する系も構築した。この系を用いてTAR-Iβを分泌発現させることを試みたが、まだ明確な結論は得られていない。高分子量型クロマチン因子HIRAに関しても、CspBプロモータおよびペニシリンG応答プロモータ配列を用いて発現を検討中である。今後は、これまでに得られた結果を更に発展させ、コリネ型細菌を異種タンパク質発現に安定的に用いることができるように開発を続けたい。

This year, the development of TAF-Iβ from Escherichia coli and CspB from Escherichia coli was studied. CIA and TAF-Iβ are used for refining. It is possible to discover the quality of the product, to refine it, to discover the CIA, to discover the TAF-Iβ, and to discover the CspB. The expression of the protein is similar to that of the protein. The rate of cell destruction and the rate of quality recovery of bacteria are low. In addition, the secretion of the protein is necessary for the development of the cell. CIA,TAF-I beta secretion gene fusion, CspB gene expression, secretion gene expression and identification in vitro Problem solving method: easy to remove bacteria, easy to add bacteria, easy to use bacteria, easy to use bacteria, easy This system is used to produce TAR-Iβ. The discovery of the use of high-molecular-weight CRMA factor HIRA, CspB PROMO and PONISHIRIN G PROMO is under discussion. In the future, the results will be further developed, and the development of heterotrophic bacteria will be further developed.