gp120のX線結晶構造解析とその立体構造に基づいたHIVの感染メカニズムの解明

gp120的X射线晶体结构分析及基于其三维结构阐明HIV感染机制

• 批准号: 11161213
• 负责人: 千田 俊哉
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Nagaoka University of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161213/
• 关键词: HIV; 結晶化; X線結晶構造解析; SDF-1α; gp120; gp41; 温度因子

1)gp120現在までにセンダイウイルスの発現系を使用して発現させたgp120およびgp140(gp120とgp41にプロセスされる前の状態の蛋白質)を用いて結晶化を進めてきてた。その結果微小ではあるがgp120の結晶らしきものを得た。高エネルギー加速器研究機構の放射光実験施設でこの微小な結晶を用いて、回折実験を行ったが、回折パターンを得ることはできなかった。そこで、現在までのアプローチに加え、gp120とgp41の相互作用部位に焦点をあてて、この両者の相互作用を見るために、gp41とgp120のN末端約100残基程度からなる融合蛋白質(gp41-N(gp120))を発現させて、これを構造解析する試みも開始した。現在は、大腸菌を用いてのgp41-N(gp120)の大量発現系の構築を行っている。2)SDF-1αSDF-1αの結晶としては、現在のところ3種類のものが得られている。そのうちの2つに関して立体構造解析を完了した(論文投稿中)。得られた構造から、SDFは、結晶中では2量体を形成していること、ループ部分の運動性が高いことなどが明らかになった。また、温度因子の比較から、高分解能の回折点を与えない結晶では、結晶中の分子間相互作用に関与するアミノ酸の温度因子が極めて高いことを見出した。反対に、高分解能の回折点を与える結晶では、これらの残基は、原子全体の平均の温度因子より低い温度因子を持っていることが明らかになった。これらの知見は、変異体を利用した良質の結晶作成に応用可能であると考えられる。

1) gp120 is now used for the development of protein and gp140 (gp120 and gp41) is used for the crystallization of protein. The result is tiny, and the gp120 is crystalline. The radiation light of the high-speed accelerator research institute is used for the application of small crystals, reflection, and reflection. The fusion protein (gp41-N(gp120)) was discovered at about 100 residues from the N-terminal of gp41 and gp120, and the structural analysis of the fusion protein was started. Now, the construction of a large number of production systems for E. coli is under way. 2)SDF-1α is crystallized and present in three species. The analysis of three-dimensional structure has been completed (paper submission) The structure, SDF, crystal, volume, formation, movement, etc. Comparison of temperature factors, high decomposition energy, inflection point, crystallization, molecular interaction, acid temperature factors, high decomposition energy, high decomposition energy, high The average temperature factor of the whole atom is low. This is the first time that we've seen this.

项目成果

Sugimoto, K.: "Crystal structure of an aromatic-ring opening dioxygenase LigAB, a protocatechuate 4,5-dioxygenase, in aerobic condition"Structure Fold Des.. 7. 953-965 (1999)

Sugimoto, K.：“有氧条件下芳香环开双加氧酶 LigAB（一种原儿茶酸 4,5-双加氧酶）的晶体结构”结构折叠设计.. 7. 953-965 (1999)

Sugimoto K.: "Purification and Crystallization of a Catechol 2,3-Dioxygenase PheB from Bacillus stearothermophilus BR219"Protein and Peptide Lett.. 6. 403-406 (1999)

Sugimoto K.：“来自嗜热脂肪芽孢杆菌 BR219 的儿茶酚 2,3-双加氧酶 PheB 的纯化和结晶”蛋白质和肽快报.. 6. 403-406 (1999)

Ohtsubo Y.: "PcpA, which is involved in the degradation of pentachlorophenol in Sphingomonas chlorophenolica ATCC39723, is a novel type of ring-cleavage dioxygenase"FEBS Letters. 459. 395-398 (1999)

Ohtsubo Y.：“PcpA 参与氯酚鞘氨醇单胞菌 ATCC39723 中五氯苯酚的降解，是一种新型的环裂解双加氧酶”FEBS Letters。

Sugimoto, K.: "Purification and crystallization of a protocatechuate 4,5-dioxygenase LigAB from Sphinggomonas pausimobilis SYK-6"Protein and Peptide Lett.. 6. 55-58 (1999)

Sugimoto, K.：“来自 Sphinggomonas pausimobilis SYK-6 的原儿茶酸 4,5-双加氧酶 LigAB 的纯化和结晶”Protein and Peptide Lett.. 6. 55-58 (1999)