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遺伝子導入による多機能培養粘膜の作製と移植に関する研究

基因转移多功能培养粘膜的制备及移植研究

基本信息

批准号：
10771124
负责人：
畠賢一郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究期間に明らかになったことは次の事項である。1.培養口腔粘膜細胞にレトロウイルスを用いて遺伝子導入が可能であった。われわれが通常移植組織として用いている3T3をFeederとする方法でも、レトロウイルスベクターを用いることにより遺伝子導入が可能であった。その際の遺伝子導入効率は70cells/mm2程度だった。2.セレクションを行うことで遺伝子導入細胞のみで構成された培養粘膜上皮シートが完成した。G418を含むselective mediumにより、セレクションを行った結果、100%導入細胞により構成された培養粘膜上皮が完成した。その際、通常用いられている血清添加培地ではなく、無血清培地(KGM)を用いることにより、セレクション中の細胞分化を制御でき効果的な培養粘膜上皮の作製が可能となった。3.動物への移植実験において局所発現を得た。前述の遺伝子導入培養粘膜上皮をヌードマウスに移植した。移植の方法はBarrandonらの報告した方法を用い、矩形皮弁内側への移植を行った。その結果、移植された遺伝子導入細胞は遺伝子発現しX-Ga1染色にて観察した際には、肉眼的および組織学的にも陽性細胞が確認できた。。この発現は徐々に低下したが移植後5週目においても認められた。4.末梢血中に導入遺伝子由来タンパクの発現が確認できた。ヒト血液凝固第IX因子遺伝子導入培養粘膜上皮を前述の方法同様に移植した。その結果、マウス移植群に第IX因子の発現を認めた。経時的観察により、これら発現は3日目で約1.6ng/mlであったが、徐々に低下し23日目には約0.8ng/mlにとなった。以上の結果により培養口腔粘膜上皮細胞は遺伝子導入における標的細胞として有用であることが示された。

During this study period, the number of events was increased. 1. It is possible to introduce the gene into cultured oral mucosa cells. In general, transplantation of tissue is possible using the Feeder method. The efficiency of gene transfer was 70cells/mm2. 2. The culture of mucosal epithelium was completed after the introduction of the gene into the cells. G418 contains selective medium, and 100% of the cells introduced into it are composed of cultured mucosal epithelium. At the same time, when serum-supplemented culture medium is usually used, or serum-free culture medium (KGM) is used, it is possible to control cell differentiation in the library and produce effective cultured mucosal epithelium. 3. Animal transplantation is a process of discovery. The gene was introduced into the cultured mucosa epithelium and transplanted into it. Transplantation method Barrandon's report Method of Transplantation of Rectangular Skin Results: Transplanted cells were identified by X-Ga1 staining and by macroscopic and histological examination. This is the first time I've ever seen this. 4. The discovery of the origin of the introduced gene in the peripheral blood has been confirmed. The blood coagulation factor IX gene was introduced into the cultured mucosa epithelium in the same manner as described above. The results of the study showed that the expression of factor IX in the transplant group was significantly higher than that in the control group. The detection time is about 1.6ng/ml on the 3rd day and 0.8ng/ml on the 23rd day. The above results show that the cultured oral mucosa epithelial cells are useful for gene transfer.