任意の細胞に特異的遺伝子導入するための組換えレトロウイルスベクターの産生系の確立

建立重组逆转录病毒载体生产系统，将特定基因导入任何细胞

• 批准号: 08877347
• 负责人: 鈴木 聡
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877347/
• 关键词: 遺伝子治療; レトロウィルスベクター; HIV; CD4; レトロウイルスベクター

HIV-gp120 binding domainを持つtruncateしたCD4分子を挿入したchimeric envelopeを発現させたecotropic retro viral vector産生細胞を樹立した。この産生細胞からつくられるretroviral vector particleは、chimeric env.を取り込んでおりHIV-gp120発現細胞への特異的な遺伝子導入が可能であった。しかし、導入効率は、低くtiterは10〜100cfu/mlであった。そのため、full lengthのCD4を挿入したchimeric env.を構築したがcytosolでのみ発現が得られ、何らかの機序によりcell surfaceへの輸送の段階で阻害を受けたと考えられた。さらに、導入効率を上げる試みとしてHIVの感染のco-receptorであるfusinをvector 産生細胞に発現させvector particleへの取り込みを検討中である。別な方法として、HIVのgp120に対する抗体のvariable regionをcloningして同様にecotropic envelopeに組み込んだchimeric env.を作成した。このchimeric envも細胞のなかでのみ発現が認められた。しかし、HIV-vector産生plasmidとco-transfectionするとHIV-env.gp120の発現が抑制されることから、細胞内で発現したchimeric env.は、HIV-gp120とinteractionしていると考えられた。今後さらに改変を加え、cell surfaceでの発現を検討したい。

HIV-gp-120 binding domain is used to detect the presence of CD4 molecules in the chimeric envelope and to establish an ecotropic retro viral vector. This is a retroviral vector particle, chimeric env., which can be introduced into HIV-gp120 cells. The introduction rate is 10 ~ 100cfu/ml. The full length of the CD4 is inserted into the chimeric env. In addition, the introduction rate of HIV infection co-receptor is increasing, and the expression of vector particle is increasing. Different methods include cloning, cloning, and constructing an ecotropic envelope containing the variable region of HIV gp120. This chimeric env cell is a very important part of our culture. HIV-vector plasmid co-transfection inhibits HIV-env. gp120 production and intracellular chimeric env. interaction. In the future, the cell surface will appear in the discussion.