増殖型トリレトロウイルスベクターを用いた遺伝子導入法による神経細胞死機構の解析

使用繁殖型禽逆转录病毒载体通过基因转移方法分析神经细胞死亡机制

• 批准号: 11770006
• 负责人: 佐藤 昇
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770006/
• 关键词: ニワトリ胚; 遺伝子導入; レトロウイルスベクター; 細胞死; 運動ニューロン; Bcl-2; レトロウイルス; RCASBP; 神経

本年度は前年度の研究成果を踏まえて、Bcl-2遺伝子を増殖型トリレトロウイルスベクター(RCASBP)を用いて鶏胚脊髄運動ニューロンへ導入して細胞死への影響を検討した。1)鶏胚(E4.5;stage24)の頚髄前角においてはpyknosisの形態像を伴った細胞死(アポトーシス)が多く認められるが、RCASBP(B)bcl-2を感染させた鶏胚では、頚髄の前角においてpyknosisの形態像が著明に減少していた。またアポトーシスに特徴的なDNAの断片化をTUNEL反応によって調べると、野生型やRCASBP(B)EGFPを感染させた鶏胚ではTUNEL陽性細胞が頚髄前角に多く認められたが、RCASBP(B)bcl-2を感染させた鶏胚においてはTUNEL陽性細胞は著明に減少していた。2)頚髄運動ニューロンの細胞死が始まる直前(E4;stage23)の運動ニューロン数を運動ニューロン特異的なマーカーであるislet-1/2に対する免疫染色によって検討したところ、野生型の胚、RCASBP(B)EGFPを感染させた胚、RCASBP(B)Bcl-2を感染させた胚の間でislet-1/2陽性細胞数に差は認められなかった。3)頚髄運動ニューロンの細胞死が終了した後(E5;stage26)の運動ニューロン数を同様に比較したところ、RCASBP(B)Bcl-2を感染させた胚では他に比べて明らかにislet-1/2陽性細胞が増加していた。4)以上から鶏胚(E4.5)における頚髄運動ニューロン死はBcl-2分子を導入することによって抑制されることが明らかになった。本研究によって頚髄運動ニューロン死に関与する分子の一つが初めて明らかにされ、また増殖型トリレトロウイルスベクターが鶏胚の発生研究において有用な手法であることが確認された。

は before this year's annual の research tread を ま え て, Bcl - 2 but 伝 を rights type ト リ レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー (RCASBP) を い て 鶏 embryo spinal marrow movement ニ ュ ー ロ ン へ import し て cell death へ の influence を beg し 検 た. 1)鶏 embryo (E4.5; Stage24) の 頚 marrow anterior horn に お い て は pyknosis の form like を with っ た cell death (ア ポ ト ー シ ス) が く to recognize more め ら れ る が, RCASBP (B) the BCL - 2 を infection さ せ た 鶏 embryo で は, 頚 marrow の anterior horn に お い て pyknosis の form like が zhao Ming に reduce し て い た. ま た ア ポ ト ー シ ス に, 徴 な の DNA fragment of を TUNEL anti 応 に よ っ て adjustable べ る と, wild type や RCASBP (B) EGFP を infection さ せ た 鶏 embryo で は TUNEL positive cells が 頚 marrow anterior horn に く to recognize more め ら れ た が, RCASBP (B) the BCL - 2 を infection さ せ た 鶏 embryo に お い て は TUNEL Positive cells are marked with に to reduce the number of て て た た. 2)頚 pulp movement ニュ ロ ロ <s:1> <s:1> the death of a <s:1> cell が begins まる before (E4; Stage23) の movement ニ ュ ー ロ ン number を movement ニ ュ ー ロ ン specific な マ ー カ ー で あ る itouch - 1/2 に す seaborne る immune dyeing に よ っ て beg し 検 た と こ ろ, wild の embryo, RCASBP (B) EGFP を infection さ せ た embryo, RCASBP (B) the Bcl - 2 を infection さ せ た between embryo の で isle The number of t-1/2 positive cells に difference められな recognition められな った った. 3) 頚 marrow movement ニ ュ ー ロ ン の cell death が end し た (E5; stage26) after の movement ニ ュ ー ロ ン with others in several を に compare し た と こ ろ, RCASBP (B) the Bcl - 2 を infection さ せ た embryo で は he に than べ て Ming ら か に itouch - 1/2 positive cells が raised plus し て い た. More than 4) か ら 鶏 embryos (E4.5) に お け る 頚 marrow movement ニ ュ ー ロ ン die は Bcl - 2 molecular を import す る こ と に よ っ て inhibit さ れ る こ と が Ming ら か に な っ た. This study に よ っ て 頚 marrow movement ニ ュ ー ロ ン die に masato and す molecules る の つ が early め て Ming ら か に さ れ, ま た rights type ト リ レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー が 鶏 embryo の 発 raw research に お い て な technique useful で あ る こ と が confirm さ れ た.

项目成果

Gotow,T.,M.Shibata,S.Kanamori,O.Tokuno,Y.Ohsawa,N.Sato,K.Isahara,Y.Yayoi,T.Watanabe,J.F.Leterrier,M.Linden,E.Kominami,Y.Uchiyama.: "Selective localization of Bcl-2 to the inner mitochondrial and smooth endoplasmic reticulum membranes in mammalian cells"Ce

Gotow,T.,M.Shibata,S.Kanamori,O.Tokuno,Y.Ohsawa,N.Sato,K.Isahara,Y.Yayoi,T.Watanabe,J.F.Leterrier,M.Linden,E.Kominami,Y.

Isahara,K.,Y.Ohsawa,S.Kanamori,M.Shibata,S.Waguri,N.Sato,T.Gotow,T.Watanabe,T.Momoi,K.Urase,E.Kominami,Y.Uchiyama.: "Regulation of a novel pathway for cell death by lysosomal aspartic and cysteine proteinases"Neuroscience. 91・1. 233-249 (1999)

谏原、K.、Y. Ohsawa、S. Kanamori、M. Shibata、S. Waguri、N. Sato、T. Gotow、T. Watanabe、T. Momoi、K. Urase、E. Kominami、Y. Uchiyama。： “溶酶体天冬氨酸和半胱氨酸蛋白酶调节细胞死亡的新途径”神经科学91・1。

Chung,K.C.,J.H.Park,C.H.Kim,H.W.Lee,N.Sato,Y.Uchiyama,Y.S.Ahn.: "Novel biphasic effect of pyrrolidine dithiocarbamate on neuronal cell viability is mediated by the differential regulation of intracellular zinc and copper ion levels, NF-kappaB, and MAP kin

Chung,K.C.,J.H.Park,C.H.Kim,H.W.Lee,N.Sato,Y.Uchiyama,Y.S.Ahn.：“吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对神经元细胞活力的新型双相作用是通过细胞内锌和铜离子水平的差异调节介导的，