小眼球症関連転写因子による細胞分化と形質発現の制御機構

小眼相关转录因子对细胞分化和性状表达的控制机制

基本信息

批准号：
11770070
负责人：
安元研一
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770070/
关键词：
tyrosinase gene expression microphthalmia MITF transcriptional regulation TRP-2 LEF-1 Wnt melanin Waardenburg syndrome

项目摘要

前年度の成果を引き継ぎ以下の目的について研究を進めた。1.MITF遺伝子のM型プロモーターの制御機構の解析。神経堤細胞からメラノサイトへの分化過程において、MITF遺伝子のM型プロモーターの発現をWntシグナルが制御している事を見出した。まず、Wnt-3aによってMITF-Mの発現が誘導される事を明らかにした。さらに、Wntシグナルに応じて機能する転写因子LEF-1がM型プロモーターの標的配列に特異的に結合し転写を上昇させる事を見出して報告した。さらにM型プコモーターの上流-15kb付近にメラノサイトにおける発現に重要な機能を持つ領域を同定し、その領域に機能する因子について解析を行った(投稿準備中)。2.メラノブラストマーカーであるTRP-2遺伝子の発現制御機構の解析。TRP-2遺伝子のプロモーターに存在する色素細胞特異的な発現に機能する領域DDE1の解析を行った。DDE1にはメラニン産生細胞に特異的な転写因子が複数結合する事を明らかにした。そしてHMG boxを持つ転写因子とEtsファミリーに属する転写因子がその結合因子である事を報告している3.RPEにおけるMITFの標的遺伝子の単離RPEにおいてMITFの野生型と変異型を構成的に発現させた培養RPEを作成し、cDNAサブトラタショシ法によるMITFの標的遺伝子の単離を試みた。サブトラクション後のcDNAでは構成的に発現している遺伝子は除かれている事を確認し、その後発現量に差のあるcDNAクローンを探索した。この研究は現在も継続中であり、既にいくつかのクローンについては解析を行うとともにさらにクローンの単離を進めている。

我们持续了上一年的结果，并对以下目标进行了研究。 1。分析MITF基因M型启动子的调节机制。在分化从神经rest细胞为黑素细胞的过程中，发现Wnt信号调节MITF基因的M型启动子的表达。首先，揭示了WNT-3A诱导MITF-M的表达。此外，我们报道了响应Wnt信号的转录因子LEF-1特异性结合了M型启动子的目标序列并增加了转录。此外，在M型PUCO电动机上游的-15KB周围鉴定出具有对黑素细胞表达功能重要的区域，并对该区域功能的因子进行了分析（以准备发布）。 2。分析TRP-2基因的表达控制机理，一种黑素细胞标记。分析了存在于TRP-2基因启动子中的色素细胞特异性表达的区域DDE1。结果表明，特定于产生黑色素细胞的多个转录因子与DDE1结合。 3. MITF在RPE中的靶基因的分离，然后我们创建了一个培养的RPE，该培养的RPE构成表达MITF的野生型和突变形式，并试图使用cDNA subtratashosi方法分离MITF的靶基因。据证实，在减法后，在cDNA中除去了组成型表达的基因，然后搜索具有不同表达水平的cDNA克隆。这项研究仍在进行中，已经分析了几个克隆，正在进行进一步的孤立克隆。